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逍遥散对肠易激综合征模型大鼠结肠黏膜5-h、ser的调节作用

在肠压综合征（ibs）的发病机制中，内脏感觉异常的机制是最广泛的接受的，内脏的高敏感性发生机制是非常复杂的。其中，5-羟色胺（5-ht）信号在脑肠信息传输中发挥着重要作用。前期研究表明,逍遥散可改善IBS胃肠道的分泌和转运,对内脏高敏感有调节作用,本研究以心理应激联合免疫诱导致敏法建立IBS大鼠模型,研究肠黏膜中5-HT、5-HT转运体的异常变化,揭示IBS中5-HT信号系统参与脑-肠轴对内脏敏感性异常调节的途径及逍遥散作用环节。现将结果报告如下。

1实验材料

1.1动物

同批清洁级雌性SD大鼠48只,体重200±10g,由浙江中医药大学实验动物中心提供。

1.2含生药量的混悬液的配制

逍遥散(柴胡、白芍、当归、茯苓、白术各9g,薄荷、生姜、甘草各4.5g),煎煮2次,浓缩为含生药量1g/ml的药液。阳性对照药为匹维溴胺(法国苏威制药,批,用蒸馏水配制成1mg/ml的混悬液。鸡卵清蛋白(GradeⅤ),购自上海欧韦达生物技术有限公司(美国Sigma公司进口分装)。

1.3仪器和试剂

大鼠5-HT、SERT抗体酶联免疫分析试剂盒(批号20100710),由上海达为科生物科技有限公司提供。Olympus-CH2显微镜,由日本欧林巴斯光学工业株氏会社生产,BIO-TEX800酶标仪,由美国宝特仪器有限公司生产。8F导尿管,由浙江华东医药股份有限公司提供。

2实验方法

2.1组

大鼠适应性喂养1周后,随机分为正常组、模型组、逍遥散低、中、高剂量组和阳性对照组(匹维溴胺组),每组8只。

2.2免疫诱致血药激学鸡卵清蛋白法

以心理应激联合免疫诱导致敏法建立IBS模型。心理应激采用慢性束缚加夹尾刺激。大鼠每5只同笼,用裹有海绵的夹子夹大鼠尾巴近端1/3处,注意不损伤皮肤,使其激怒,寻衅与其它大鼠撕打,从而激怒全笼大鼠打斗,刺激时间持续30min。夹尾刺激结束1h后,予30g/L戊巴比妥钠(1ml/kg)麻醉,用宽布带束缚前肩、前上肢及胸部,限制其搔抓头面部,但不控制其活动。自大鼠清醒后开始计时,束缚时间为2h。免疫诱导致敏采用腹腔注射鸡卵清蛋白法,以鸡卵清蛋白30mg加入浓度为10mg/ml的氢氧化铝凝胶1ml中,充分混匀后腹腔注射。除正常组外,其余各组大鼠于实验第1天,先施以心理应激。心理应激结束后,行腹腔注射鸡卵清蛋白。实验第2天至第14天,仅施以单纯心理应激,每天1次。

2.3给药及剂量及灌胃

造模结束后第2天起各组大鼠分别灌胃给药,剂量按照实验动物研究“等效剂量”的计算方法。逍遥散低、中、高剂量组给药量分别为5g/kg·d、10g/kg·d、20g/kg·d,匹维溴胺组给药量为15mg/kg·d,正常组、模型组灌服生理盐水作为安慰对照,给药量为10ml/kg·d。每天1次。为消除生物节律影响,均于上午8:00开始灌胃。连续给药14天。

2.4测试指标

如下。

2.4.1最小注容量阈值20d

给药结束后第2天评估AWR的最小容量阈值以反映其内脏敏感性。大鼠麻醉下,将石蜡油润滑后的导尿管经肛门插入,球囊末端距离肛门1cm,用胶布把导管和大鼠尾巴根部缠在一起,固定气囊。大鼠苏醒后,放在台上。30min适应期后经导尿管外口向球囊内注入26℃～28℃生理盐水扩张肠道,记录引起大鼠腹部收缩反射的最小注水量,即最小容量阈值。每一阈值重复进行3次扩张,每次扩张持续20秒,间隔5min,数据取均值。

2.4.25-ht和sert测量

给药结束后第2天处死大鼠,取大鼠距肛门7cm处结肠,分离1cm肠段4块,以酶联免疫法测定结肠黏膜5-HT、SERT水平。

2.5量值方差分析

采用SPSS13.0统计软件,计量数据以均数±标准差表示,多组间差异比较采用单因素方差分析,以P0.05或P0.01为有统计学意义。

3结果

3.1差异显著性p0.0

模型组引起AWR的最小容量阈值明显低于正常组,差异有显著性(P0.01)。逍遥散低、中、高剂量组、匹维溴胺组引起AWR的最小容量阈值均高于模型组,差异有显著性(P0.05)。见表1。

3.2正常组和正常组差异有显著性

模型组大鼠结肠黏膜5-HT水平明显高于正常组,SERT水平明显低于正常组,差异有显著性(P0.01)。逍遥散低、中、高剂量组、匹维溴胺组结肠黏膜5-HT水平均低于模型组,SERT水平均明显高于模型组,差异有显著性(P0.05或P0.01)。见表2。

4肠道功能异常

5-HT信号系统与IBS发病密切相