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华南师范大学实验报告
学生姓名 学号：
专业：化学师范 年级、班级：09级化四
课程名称：近代有机分析方法和实验实验 时间：2011年11月9日
实验六：高效液相色谱法用于有机农药残留的分离和分析
【实验目的】
1、应用高效液相色谱法对磺胺类抗生素的定性和定量检测
2、学习谱图和数据的处理方法
【实验原理】
磺胺族抗生素包括磺胺嘧啶，磺胺二甲嘧啶，磺胺甲噁唑，等,被广泛应用到水产、畜禽类养殖中。它们被添加到动物饲料中,以促进动物的生长以及防治各种疾病,如果不能严格控制停药期,很容易造成在动物肉和组织中残留,给人体健康带来危害,因此世界各国对畜禽肉中的磺胺族残留都有严格的限量要求。GB/T5009.116-2003用液相色谱法检测畜禽肉中的磺胺类药物残留量,操作简单快速,但是该方法灵敏度比较低。
【实验仪器与试剂】
仪器：岛津液相色谱仪，SPD-20A检测器，LC-20AT泵，微量进样器，C18色谱柱
试剂：磺胺嘧啶标准溶液，磺胺吡啶标准溶液，磺胺嘧啶-磺胺吡啶混合液（1：1），乙腈（AR），0.05%甲酸溶液
样品部分物理参数：
样品
磺胺嘧啶
磺胺吡啶
分子式
C10H10N
4O2S
C11H11N3
O2S
分子 熔点
量
250.2 252-25
8 8℃
249.4 191-19
9 3℃
外观 溶解性
白色或类白色结 溶于稀盐酸，微溶于乙醇
晶或粉末，无臭无 或丙酮，几乎不溶于水，
味，遇光色渐变暗 易溶于氢氧化碱溶液或
氨溶液
黄棕至白色粉末 微溶于水
【实验步骤】
1、准备
准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。（这里用的是流
动相是乙腈(B)和0.05%甲酸溶液(A)，分别用有机相系和水相系的0.45μm滤膜过滤，超声
脱气20min。）
根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。
配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。（即
分别称取0.10g的磺胺嘧啶、磺胺吡啶用甲醇定容至100.0mL，用0.45μm滤膜过滤（先
在一次性注射器加上0.45μm滤膜，然后把活塞杆拉出来，把要过滤的溶液倒进去再把杆
推进滤出溶液。）得到磺胺嘧啶和磺胺吡啶的标准液分别为1mg/mL（1000ppm）。分别吸取磺胺嘧啶和磺胺吡啶标准溶液各5mL，置于10mL容量瓶中磺胺吡啶和磺胺嘧啶-磺胺吡啶混合0.5mg/mL（500ppm）。
检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。2、开机
接通电源，依次开启不间断电源、B泵、A泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站（即电脑桌面上的CS-LightRealTimeAnalysis）。
3、参数设定
波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键接着按[Enter]键，用数字键输入所需波长值281nm，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。,w4
流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1.0mL/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出。
流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按[conc]键，用数字键输入流动相B乙腈的浓度百分数(17%)，按[Enter]键确认。按[CE]键退出。
4、更换流动相并排气泡
将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；
逆时针转动A/B泵的排液阀180°，打开排液阀；
按A/B泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；
将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。
如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。
如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按[pump]键，冲洗3min后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。
5、平衡系统
按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开在线色谱工作站软件，输入实验信息并设定各项方法参数后，按下数据收集页的[查看基线]按钮。
等度洗脱方式;g5J;Q
按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。
检查各管路连接处
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