肾 活 检 冰 冻 切 片 免 疫 荧 光 染 色.docxVIP

肾 活 检 冰 冻 切 片 免 疫 荧 光 染 色.docx

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肾活检冰冻切片免疫荧光染色

(直接法)

一.试剂

冷冻包埋剂OCT

荧光抗体:IgG-FITC,IgA-FITC,IgM-FITC,C3-FITC,C4-FITC,C1q-FITC,

Fg-FITC。均用抗体稀释液进行1:100稀释。

二.取材

准备冷冻头(标号并预先包埋少量OCT)、纱布(生理盐水浸湿)、冰块

活检标本取出后,立即放入装有纱布的Tip管中,置冰块上送回实验室

组织立即置冷冻好的冷冻头上,再包埋少量OCT,恒冷切片机内制作冰冻切片(切片厚度为3um),用蒸馏水冲洗掉切片上的OCT;加稀释好的抗体,避光,湿盒内4℃过夜;蒸馏水洗2分钟×3次;荧光显微镜观察结果

三.注意事项:

取材后标本须快速冷冻

切片温度需适宜,不宜过高或过低

染色过程中必须防止切片干燥,严格避光

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