盐胁迫对两种盐碱地植物sod和pod活性的影响.docxVIP

盐胁迫对两种盐碱地植物sod和pod活性的影响

许多生物在低温、干旱和紫外辐射等恶劣环境下对植物的抗逆性进行了研究。结果表明，在极端环境条件下，植物体内存在过度的自由基，这会影响细胞膜系统，导致细胞衰老或死亡。但细胞内的酶系统超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)等及非酶系统抗氧化物质抗坏血酸(ASA)、类胡萝卜素(Car)和脯氨酸(Pro)等具有清除活性氧自由基、保护膜系统、使细胞不受伤害等的作用和功能。植物体内抗氧化物质的活力大小和含量多少是植物能否适应不良环境的重要表现,其与植物抗逆性的强弱能力有着密切关系。SOD和POD在解除细胞内有害自由基方面的作用是不同的。SOD能清除植物体内产生的·O2-,从而保护植物体免受自由基及其衍生物的伤害,但SOD在清除·O2-时,其产物H2O2对植物体也有危害,且H2O2又能形成性质更活泼、毒性更强的·OH,而POD则是体内分解H2O2的关键酶类,因此,内源H2O2的及时清除对生物体来说是至关重要的。另外,POD具有促进木质化作用,这也有利于植物抵抗环境胁迫。

青海湖地处青藏高原东北部,是我国面积最大的微咸水湖。据估计,湖区盐碱地的面积约为7×104hm2,处于高海拔、低气压、强辐射、寒旱等十分恶劣的环境中。二裂委陵菜(Potentillabifurca)和鹅绒委陵菜(Panserina)是广布于青海湖畔的两种植物,长期的自然选择使其获得极强的抗低温、强UV-B辐射和盐碱等逆境胁迫的能力。研究其体内SOD和POD的活性变化,对于揭示高寒植物独特的抗性机理,筛选优良的抗性种质资源以及保护青藏高原脆弱的高寒盐生生态系统均具有重要意义。

1材料和方法

1.1青海湖地区自然旅游地

青海湖是我国第一大微咸水湖,位于青藏高原东北部,在青海海北与海南两州的交界处,介于北纬36°32′~37°15′,东经99°36′~100°47′,东西长约109km,南北宽约65km,平均海拔3195.59m,湖水容积7.388×104m3,平均水深16m,最大水深27m,湖水PH值9.12,电导率2421.9ds/cm,湖泊面积4304.60km2。青海湖属新构造断陷湖泊。盐渍、低温、低气压、强辐射是该地区生态条件的显著特征。采样地点位于青海湖东南部,从水陆交界向南地势渐高,土壤含盐量亦呈下降趋势。

1.2实验材料

以自然生长于青海湖东南部距水陆交界处5m、50m、100m、250m处两种植物生长正常功能的叶为实验材料。

1.3盐浓度的测定

用DDS-11A型电导仪测定青海湖东南部距水陆交界处5m、50m、100m、250m处土壤溶液的电导值,表示盐浓度。2004年9月在青海湖畔盐碱地上采集两种植物生长正常功能的叶,立即放入冰瓶中,带回西宁实验室。用4℃左右的冷水洗净泥土,然后用同样温度的蒸馏水洗3次,用滤纸吸干水分,放入保鲜袋中,并立即放入-30℃的冰箱中冷冻保存,以备测定分析用,进行SOD和POD活性测定。

1.4测量

1.4.1sed活性的测定

1.4.1.l-1ph7.8pbs酶液的制备

取0.50mm大小的叶片放入5ml酶提取缓冲液(62.50mmol·L-1PH7.8PBS含3%PVP)和少量的石英砂中(PVP现用现加),于冰浴中研磨成匀浆,12000rpm离心5min,上清液即为酶液。(所有操作均在0~4℃条件下进行)

1.4.1.酶活性的测定

在含有130mmol·L-1的甲硫氨酸、1.125mmol·L-1的氮蓝四唑(NBT)、60μmol·L-1的核黄素、0.3mmol·L-1的EDTA和62.50mmol·L-1PH7.8的磷酸缓冲液的3ml反应液中,加入0.2ml的酶液,在400lux荧光下照光10min,并在560nm下测定光吸收,以缓冲液代替酶液作空白,酶活性单位采用抑制NBT光化学还原的50%为一个酶单位(u),测定重复三次,酶活性以u·mg-1蛋白表示。

1.4.2紫外分光光度法

酶液提取方法同SOD。取1ml酶液(或稀释5倍),加入3ml愈创木酚反应混合液,混均,25℃下温浴5min,再加入20μLH2O2启动反应后,立即于470nm波长处作时间扫描,在UV-1601型紫外一可见分光光度计下,测定前10s内的吸光度变化值△A470。以每分钟OD值增加0.01为一个酶活单位,酶活性以u·mg-1蛋白表示。

2结果

2.1不同盐分浓度对二裂委陵菜叶片sod活性的影响

两种植物叶片中SOD活性的变化结果,如图1所示:随着盐胁迫强度的增加,二裂委陵菜和鹅绒委陵菜叶片中SOD的活性呈明显增加的趋势。当盐浓度在1000ds·cm-1时,两种植物叶片中SOD活性相差不大,约为6.20u·mg-1蛋白;当盐浓度在1400ds·cm-1时,二裂委