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雄黄水飞炮制工艺的正交优选

雄黄是雄黄族的一员，具有辛辣性、性温性和毒性。具有清热解毒、杀虫、除湿、祛痰、疟疾等功效。主含二硫化二砷(As2S2),并夹有少量剧毒的可溶性砷盐三氧化二砷(As2O3),俗称砒霜,即As(Ⅲ),对人体毒性极大,是卫生部颁布的28种毒性药材之一。过去由于古人对雄黄毒性认识不够,使其在方药中应用广泛,并延续到现代,因此如何通过炮制方法来降低雄黄毒性,除去夹杂在雄黄中的砒霜,对含雄黄中成药的用药安全是十分必要的。

雄黄入药炮制始于《神农本草经》,历代沿用的制法有干研法、水飞法、煮法、熬法、油煎法、复制法、火飞法等,中国药典规定的雄黄炮制方法是干研法和水飞法。

目前中成药中雄黄的用量较大,但是却没有统一的炮制方法和质量控制标准。传统的干研法制粉效率较高,但不能减毒。而水飞法可起到净制减毒作用,使成品中As2S2的含量显著高于原药材。水飞法的加水量、操作次数和烘干温度对降低雄黄成品中As2O3的含量有直接影响,但具体工艺如何,未见报道。

本研究以中国药典规定雄黄的水飞法为切入点,研究其最佳炮制工艺,同时采用离子交换色谱-氢化物发生-原子荧光光度法(HPLC-HG-AFS)研究毒性成分As2O3即As(Ⅲ)的含量,初步探讨雄黄水飞法的最佳炮制工艺,以期为雄黄的炮制工艺和质量控制研究提供科学依据。

1仪器和试剂

LC-10ATHPLCpump高效液相色谱泵(日本Shimadzu公司);AFS-820原子荧光光谱检测器(北京吉天仪器有限公司);SA-10形态分析数据工作站(北京吉天仪器有限公司);pHS-3C型酸度计(上海精密科学仪器有限公司雷磁仪器厂);ER-182A全自动电子天平(十万分之一)(日本AD公司);Easypure纯水系统(美国Barnstead公司)。

亚砷酸钠(上海试剂二厂)为分析纯;水为超纯水;所用其它试剂均为分析纯;所有样品和试剂溶液均经0.45μm的微孔滤膜过滤;所用的玻璃器皿经50%HNO3浸泡24h,用超纯水清洗3遍。

2方法和结果

2.1样品含量的测量

2.1.1研散剂的制备

取200g样品,研碎过20目筛,混合均匀,以四分法取样10份,每份10g。取10g样品置研钵中,加水5mL,研磨5min至糊状,再加水适量搅拌1min,静置2min,倾取混悬液,下沉的粗粉继续研磨,如此反复操作数次,除去杂质,合并各次混悬液,静置2h,倾去上清液,抽滤,减压干燥2h,研散。

2.1.2超声提取法

精密称取“2.1.1”项下制备的雄黄粉10mg,置具塞锥形瓶中,加水50mL,超声提取30min,静置,吸取上清液,0.45μm滤膜过滤,即得。

2.1.3对照溶液的制备

精密称取亚砷酸钠0.1g,至1000mL量瓶中,用超纯水稀释至刻度,摇匀,作为储备液(现用现稀释)。

2.1.4预柱和流动相

参照文献中方法。色谱柱:PRP-X100阴离子交换柱(250mm×4.1mm,10μm)和PRP-X100阴离子交换预柱(250mm×4.1mm,10μm)(瑞士Hamilton公司);流动相:磷酸氢二氨缓冲溶液(pH=6.0±0.2);流速:1.0mL/min;柱温:25℃;检测波长:193.7nm。

2.1.5高效液相-氢化物发生-原子荧光法

将“2.1.2”项下制备的供试品溶液和“2.1.3”项下制备的对照品溶液分别稀释至浓度在10μg/L～150μg/L范围内,注入高效液相-氢化物发生-原子荧光光度仪中,进样量为20μL。

2.2正交试验、最佳加工工艺

2.2.1因素水平表

以As(Ⅲ)的含量为考察指标,以加水倍数(以生药量计,A)、操作次数(B)、干燥温度(C)为3个因素,因素水平见表1。

2.2.2a、b因素方差分析

称取雄黄9份,每份10g,采用L9(3)4正交表安排实验,按“2.1”项下方法测定As(Ⅲ)含量,进行方差分析,结果见表2、表3。

从表2、表3结果分析可以看出,3因素的影响大小依次为ABC,且A、B因素影响具有显著性。综合分析各个因素对As(Ⅲ)溶出率的影响,确定最佳提取工艺为A3B3C1,即加15倍量水、操作8次、干燥温度为40℃。

2.2.3试验步骤

为了验证所选条件的合理性,进行了三批验证试验,从表4结果可知,所选工艺条件较稳定。

3雄黄的制备

3.1从不同用水量水飞炮制品测定结果看出,炮制品中可溶性砷盐As(Ⅲ)的含量随用水量、操作次数增多而降低,变化