高通量测序技术.docxVIP

高通量测序技术(High-throughputsequencing)又称下一代测序技术(Next-generationsequencingtechnology)，以能一次并行对几十万到U几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。根据发展历史、影响力、测序原理和技术不同等，主要有以下几种：大规模平行签名测序

(MassivelyParallelSignatureSequencing,MPSS)、聚合酶克隆(PolonySequencing)、454焦磷酸测序(454pyrosequencing)、Illumina(Solexa)sequencing、ABISOLiDsequencing、离子半导体测序(Ionsemiconductorsequencing)、DNA纳米球测序(DNAnanoballsequencing)等。高通量测序技术是对传统测序一次革命性的改变，一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定，因此在有些文献中称其为下一代测序技术(nextgenerationsequencing)足见其划时代的改变，同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能，所以又被称为深度测序(deepsequencing)。

实验过程

1.样本准备(samplefragmentation)

文库构建(librarypreparation)

测序反应(sequencingreaction)

数据分析(dataanalysis)

测序平台

自从2005年454LifeSciences公司(2007年该公司被Roche正式收购)推出了454FLX焦磷酸测序平台(454FLXpyrosequencingplatform)以来，因为他们的拳头产品毛细管阵列电泳测序仪系列 (seriescapillaryarrayelectrophoresissequencingmachines)遇到了两个强有力的竞争对手，曾推出过3730xlDNA测序仪(3730xlDNAAnalyzer)的AppliedBioSystem(ABI)这家一直占据着测序市场最大份额的公司的领先地位就开始动摇了，一个就是罗氏公司(Roche)的454测序仪(RochGSFLXsequencer)，，另一个就是2006年美国Illumina公司推出的Solexa基因组分析平台(GenomeAnalyzerplatform)，为此，2007年ABI公司推出了自主研发的SOLiD测序仪(ABISOLiDsequencer)。这三个测序平台即为目前高通量测序平台的代表。(见表一)

技术原理

技术开发者

Apply

基丁磁珠的大规模并行克隆蜒接

DNA测序法

美国Agenwurt私人基因坦学公i:(APG)

Hiurniina

合成洲序法

英国Solle泊公讪首席科孚家DavidBentley

Roche

大就榄扑行￡上阈陵台盅洲序法

0^154LifeSciences公讪的创始人JonathanRothberg

HcIidos

大就模并行单会广古成测序法

史国斯坦福大叩1.物工程学家SlephenQuake

Complete

Genomics

□NA纳聚阵列一，组台探针谢定连接

测序法

琵国CompleteGenomics公司肖席科甲家radojedrmarac

表一:主流测序平台一览

Roche454焦磷酸测序

(pyrophosphatesequencing)

IlluminaSolexa合成测序

(sequencebysynthesize)

IlluminaGenomeAnalyzerIIx测序原理

Illumina公司的新一代测序仪Hiseq2000和Hiseq2500具有高准确性，

高通量，高灵敏度，和低运行成本等突出优势，可以同时完成传统基因组学研究(测序和注释)以及功能基因组学(基因表达及调控，基因功能，蛋白/核酸相互作用)研究。Hiseq是一种基于单分子簇的边合成边测序技术，基于专有的可逆终止化学反应原理。测序时将基因组DNA的随机片段附着到光学透明的玻璃表面(即Flowcell)，这些DNA片段经过延伸和桥式扩增后，在Flowcell上形成了数以亿计Cluster，每个Cluster是具有数千份相同模板的单分子簇。然后利用带荧光基团的四种特殊脱氧核糖核苷酸，通过可逆性终止的SBS(边合成边测序)技术对待测的模板DNA进行测序。

ABISOLiD连接法测序

(sequencebyligation)

技术应用

测序技术推进科学研究的