融合His Tag重组蛋白的基因克隆、表达及亲和纯化的开题报告.docxVIP

融合HisTag重组蛋白的基因克隆、表达及亲和纯化的开题报告

一、研究背景及意义：

Histag是一种小的、多肽“标签”，通常用于Histag蛋白的纯化及定位等研究，是目前比较流行的蛋白质荧光标记方式之一。其使用方便、效果显著、成本低廉，被广泛应用于基因克隆、表达、纯化及鉴定等领域。本研究旨在利用融合Histag的重组蛋白作为研究对象，通过基因克隆、表达及亲和纯化等技术手段，开展对其生物学特性的探究，并为今后相关学科的研究提供参考和支持。

二、研究方案：

1.基因克隆：选择目标蛋白的基因序列，根据设计的引物将目的基因从基因组DNA中扩增出来，并进行筛选、纯化、酶切等处理。将目的基因与载体进行连接和转化，构建重组表达质粒。

2.表达及提取：将构建好的质粒在大肠杆菌中进行表达，利用醋酸铵等方法进行细胞破碎，使融合Histag的重组蛋白能够被释放到上清液中。通过超滤等方法对上清液进行提取，获得目标重组蛋白。

3.亲和纯化：利用Histag特异性亲和剂如Ni-NTA树脂等，对目标蛋白的Histag进行特异性结合和分离，实现重组蛋白的纯化。

4.生物学特性分析：对亲和纯化得到的重组蛋白进行SDS电泳、Westernblot检测，分析其纯度、表达量及相应荧光信号；同时利用ELISA酶联免疫吸附测定进行对其生物活性等指标的评估。

三、研究预期结果：

1.成功构建重组表达质粒，实现目标蛋白的高效表达；

2.通过Ni-NTA树脂亲和纯化技术实现目标蛋白的高效纯化；

3.利用SDS、Westernblot及ELISA等方法对重组蛋白进行纯化程度、生物活性等方面的鉴定和分析，为进一步研究其生物学特性奠定基础。

四、研究进度及计划：

1.初步设计引物，向相关公司购买相关重组质粒，计划于本学期内完成基因克隆及构建重组表达质粒的工作；

2.计划于下学期内开展表达和提取及Ni-NTA树脂亲和纯化实验，同时进行相关分析；

3.预计下学年开展ELISA实验，并完成生物学特性分析及结果总结。