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液体深层发酵羊肚菌水溶性多糖的提取分离纯化分析的中期报告
本研究旨在提取分离纯化液体深层发酵羊肚菌中的水溶性多糖,并对其进行分析。本文报告了实验室针对该研究的中期研究进展。
实验步骤
1.羊肚菌液体深层发酵。实验采用琼脂糖液体培养基对羊肚菌进行深层发酵,发酵过程中控制pH值为6.5,温度为37℃,转速为200rpm,发酵时间为72小时。
2.多糖提取。将发酵液通过滤纸将微生物量分离,过滤液和洗涤液收集后合并,过滤后加入四倍体积的绝对乙醇沉淀,再用无菌蒸馏水溶解,浓缩后用10kDa分子量为界的中空纤维膜超滤器,过滤提取上清液。
3.多糖分离。对提取的上清液进行DEAE-SepharoseFastFlow离子交换色谱柱分离,采用50mMNaCl进行逐渐升级的线性梯度洗脱,分离得到4个显着吸附峰。这四个峰分别命名为F1、F2、F3、F4。
4.多糖纯化。四个吸附峰中,将F1和F2峰收集并用纯水分离纯化。即使26.3g得到F1多糖,24.7g得到F2多糖。
5.多糖分子量分析。用Gelpermeationchromatography(GPC)仪器对F1和F2多糖进行分子量分析,发现F1多糖的相对分子质量为101,654Da,F2多糖的相对分子质量为98,332Da。
结果分析
通过该实验,成功从液体深层发酵羊肚菌中提取并分离纯化出二种水溶性多糖。经过分子量分析,F1多糖的相对分子质量为101,654Da,F2多糖的相对分子质量为98,332Da。
下一步工作将集中在对提取出的多糖进行生化和分子结构分析,并对其应用进行研究探讨。
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