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杨树原生质体分离及电融合技术体系的研究的中期报告

本次研究以杨树为研究对象，针对其原生质体分离及电融合技术体系进行了中期报告，具体进展如下：

一、原生质体分离

1.1质体提取

通过改良后的植物细胞壁水解法，成功获得杨树幼叶组织的质体悬液，其浓度达到了0.8mg/ml左右，具有较高的纯度和完整性。

1.2分离中国羊蹄甲(P.chinense)中的原生质体

通过离心、上清液收集和梯度离心等方法，成功分离出了中国羊蹄甲中的原生质体。经菌落计数后，可知质体的平均直径为20-25μm。

1.3分离杨树中的原生质体

依据离心方法和Buford中和液体系，成功取得了杨树叶绿体质体，其直径约为10-15μm，且分离纯度较高。

二、原生质体电融合

2.1实验装置

设计了一套原生质体电融合的实验装置，由融合腔、直流电源、温控水槽等组成。

2.2杨树原生质体电融合

在本实验条件下，成功实现了杨树原生质体的电融合，经观察可知，融合率、融合质量和融合效率均较高，而且不会影响细胞活性和遗传信息的完整性。

2.3电参数测试

对电参数进行了测试研究，发现电压、电流强度和电融合时间对融合质量和效率都有影响，其中较高的电压和较长的电融合时间可提高融合效率和质量。