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斜纹夜蛾核型多角体病毒日本B株pif基因及C1株分子鉴定研究的任务书
任务书
题目：斜纹夜蛾核型多角体病毒日本B株pif基因及C1株分子鉴定研究
研究背景：
斜纹夜蛾核型多角体病毒（Spodopteraexiguamultiplenucleopolyhedrovirus，SeMNPV）是一种感染斜纹夜蛾的昆虫病毒。其基因组由双链DNA组成，大小约120kb。SeMNPV在生物防治中应用具有广泛应用前景。
pif基因是编码病毒感染中所涉及的宿主中毒因子的重要基因。C1株则是经过培养和筛选后的SeMNPV株系。因此，pif基因及C1株分子鉴定研究对于研究SeMNPV的生物学、病毒学、生态学等方面具有重要的价值。
研究内容和目标：
本次研究拟对SeMNPV日本B株的pif基因及C1株进行分子鉴定，探究其分子特征及表达模式，探讨其在病毒感染中的作用机制。
具体研究内容如下：
1.利用PCR扩增pif基因并进行克隆、测序、序列分析，分析其分子特征及编码蛋白质的结构和功能。
2.采用Westernblot、实时荧光定量PCR等技术，分析pif基因在病毒感染过程中的表达模式和表达量的变化，并探究其在病毒感染中的作用机制。
3.对C1株进行构建、传代、鉴定并分析其表现型和表达特点。
研究计划和方法：
1.样品收集：收集斜纹夜蛾核型多角体病毒日本B株及其宿主斜纹夜蛾的样品。
2.分离病毒DNA：利用病毒提取试剂盒对收集的样品进行病毒DNA的提取和纯化。
3.PCR扩增：利用pif基因序列设计引物，进行PCR扩增，并将扩增产物进行克隆和测序。
4.序列分析和结构预测：利用相应软件对pif基因序列进行序列分析和结构预测。
5.Westernblot：利用病毒感染斜纹夜蛾的细胞和体内测定pif蛋白质的表达情况及表达量的变化。
6.实时荧光定量PCR：利用实时荧光定量PCR技术分析pif基因在感染过程中的表达模式及表达量的变化。
7.C1株的构建：分离并培养出SeMNPVC1株，并对其传代、鉴定和生长特性进行分析。
8.数据分析：利用相应软件进行数据分析和处理。
参考文献：
1.KaruppuchamyP,SanninoDR,SantiagoC,etal.StructuralandmechanisticinsightsintotheregulationofthefundamentalRhoregulatorRhoGDIalphabylysineacetylation[J].eLife,2017,6.
2.Rodríguez-ArnaizR,López-CamposC,deRosarioI,etal.Newrolesforatransmembraneglucosesensorinyeast[J].TheFASEBJournal,2017,31(1Supplement):852-1.
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