高效液相色谱法.ppt

经抑制柱后，一方面将大量酸转变为电导很小的水，消除了流动相本底电导的影响。同时，又将样品阳离子M+转变成相应的碱，由于OH-离子的淌度为Cl-离子的2.6倍，提高了所测阳离子电导的检测灵敏度。在分离柱后加一个抑制柱的离子色谱亦称为抑制型离子色谱或称双柱离子色谱。由于抑制柱要定期再生，而且谱带在通过抑制柱后会加宽，降低了分离度。第85页,共106页，2024年2月25日，星期天Frits等人提出不采用抑制柱的离子色谱体系，而采用了电导率极低的溶液，例如1×10-4～5×10-4mol·L-1苯甲酸盐或邻苯二甲酸盐的稀溶液作流动相，称为非抑制型离子色谱或单柱离子色谱。第86页,共106页，2024年2月25日，星期天第六节尺寸排阻色谱法（SEC）尺寸排阻色谱法又称凝胶色谱法，主要用于较大分子的分离。它不具有吸附、分配和离子交换作用机理，而是基于试样分子的尺寸和形状不同来实现分离的。尺寸排阻色谱被广泛应用于大分子的分级，即用来分析大分子物质相对分子质量的分布。第87页,共106页，2024年2月25日，星期天（1）保留时间是分子尺寸的函数，有可能提供分子结构的某些信息；(2)保留时间短，谱峰窄，易检测，可采用灵敏度较低的检测器；（3）固定相与分子间作用力极弱，趋于零。由于柱子不能很强保留分子，因此柱寿命长；（4）不能分辨分子大小相近的化合物，相对分子质量差别必须大于10％才能得以分离。第88页,共106页，2024年2月25日，星期天1、分离原理尺寸排阻色谱是按分子大小顺序进行分离的一种色谱方法。其固定相为化学情性多孔物质——凝胶，凝胶内具有一定大小的孔穴，体积大的分子不能渗透到孔穴中去而被排阻，较早地被淋洗出来；中等体积的分子部分渗透；小分子可完全渗透入内，最后洗出色谱柱。这样，样品分子基本上按其分子大小，排阻先后由柱中流出。第89页,共106页，2024年2月25日，星期天第90页,共106页，2024年2月25日，星期天2、固定相所谓凝胶，指含有大量液体（一般是水）的柔软而富于弹性的物质，它是一种经过交联而具有立体网状结构的多聚体。第91页,共106页，2024年2月25日，星期天3、流动相

能溶解样品，与凝胶相似，能润湿凝胶。

溶剂的粘度要小，因为高粘度溶剂往往限制分子扩散作用而影响分离效果。

选择溶剂还必须与检定器相匹配。常用的流动相有四氢呋喃、甲苯、氯仿、二甲基酸胺和水等。

以水溶液为流动相的凝胶色谱适用于水溶性样品；以有机溶剂为流动相的凝胶色谱适用于非水溶性样品。第92页,共106页，2024年2月25日，星期天第七节影响分离的因素1．第93页,共106页，2024年2月25日，星期天2．对流动相的要求：1）与固定液不反应2）对样品有良好溶解度k=1~10k=2~5最理想的3）与检测器匹配：UV（常用，测定波长应大于溶剂的截止波长）荧光，电化学4）使用粘度小、纯度高的流动相（甲醇，乙腈）使用前过滤、脱气第94页,共106页，2024年2月25日，星期天3．洗脱方式1）等度洗脱（恒组成溶剂洗脱）以固定配比的溶剂系统洗脱组分（一个泵）类似GC的等温度洗脱2）梯度洗脱：在一定分析周期内不断变换流动相的种类和比例即不断改变其极性（两个泵）适于分析极性差别较大的复杂组分类似GC的程序升温（沸程较长样品）第95页,共106页，2024年2月25日，星期天第96页,共106页，2024年2月25日，星期天

液相色谱分离类型选择参考表溶于水——排阻色谱，水为流动相相对分子质量＞2000不溶于水——排阻色谱，非水流动相同系物——分配色谱不溶于水异构体——吸附色谱样品分子大小差异——排阻色谱