HPLC法测定耳聋通窍丸中龙胆苦苷的含量.docVIP

HPLC法测定耳聋通窍丸中龙胆苦苷的含量

宋愿智1，姜华2，唐永红3(1.陕西省食品药品检验所，陕西西安710061；2.山东省淄博市药品检验所，山东淄博255000；3.陕西泰科诺利医药科技有限公司，陕西西安710075)

摘要：目的建立耳聋通窍丸中龙胆苦苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，色谱条件：ODS柱（5μm,250mm×4.6mmID）；乙腈--水（12：88）为流动相；流速1.0mL·min-1；检测波长270nm；进样量10μL；柱温室温。结果龙胆苦苷进样量在0.137～0.822μg范围内，其峰面积值与进样量（μg）有良好的线性关系，r=0.9994，回收率为97.3%，RSD为0.67%（n=6）。结论该测定方法分离效果好，灵敏

关键词：耳聋通窍丸；龙胆苦苷；含量测定；HPLC

耳聋通窍丸由龙胆，黄柏，大黄，栀子等十二味药材经加工制成的中药制剂，具有清热泻火，利湿通便功效，用于肝胆火盛，头眩目胀，耳鸣耳聋，耳内流胧，大便干燥，小便赤黄等症的治疗[1]。为了有效控制该制剂的质量，采用高效液相色谱法测定其中龙胆苦苷的含量，结果表明该方法简便，精密度高，重复性好，可用于本制剂的质量控制。

1仪器与试药

1.1仪器Hi-Tech高效液相色谱仪（美国SSI公司）；PhenomenexODS色谱柱(5μm,250mm×4.6mmID)；SSIP4000泵；CKKing数据处理软件系统；Hi-TechUV/Vis500检测器；BP210D电子天平（塞多利斯公司）。

1.2试药龙胆苦苷对照品（批号：0770－200306，供含量测定用）购自中国药品生物制品检定所；乙腈为HPLC级试剂（美国TEDIA公司）；水为重蒸馏水；其余试剂为分析纯（西安化学试剂厂）；耳聋通窍丸样品为本省某企业自制制剂。

2方法和结果

2.1色谱条件色谱柱：PhenomenexODS柱（5μm,250mm×4.6mmID）；流动相：乙腈—水(12：88)；流速：1mL/min；柱温：室温；检测波长：270nm；进样量：10μL。

2.2对照品溶液的制备精密称取龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含40μg的溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备取本品适量，研细，取约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25mL，放置12h，时时振摇，滤过，精密量取续滤液5mL，蒸干，残渣用流动相溶解，并转移至10mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

2.4阴性对照溶液的制备按处方比例及生产制备方法，自制不含龙胆药材的阴性样品，然后按供试品溶液的制备方法制备，即得。

2.5系统适用性试验分别精密吸取对照品溶液,供试品溶液和阴性对照溶液,在上述色谱条件下进样,记录色谱图,结果龙胆苦苷和样品中其它组分色谱峰可达到基线分离，龙胆苦苷与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5，理论板数以龙胆苦苷计为12725。同时取不含龙胆的阴性对照溶液进样，结果表明，阴性对照在龙胆苦苷色谱峰位置处无相应峰出现。对照品、供试品及阴性对照的色谱图，见图1。

2.6线性范围的考察取龙胆苦苷对照品溶液（0.137g·L-1）适量，分别配制成浓度为0.0137，0.0274，0.0411，0.0548和0.0822g·L-1对照品溶液，进样，记录色谱图，测定峰面积，结果为Y=3×10-6

2.7精密度试验取制备好的同一份供试品溶液，按拟定的色谱条件测定，重复进样5次，记录龙胆苦苷峰面积，结果RSD为1.31%。

2.8稳定性试验取供试品溶液，分别在0,3,9,12和24h进样，结果RSD为0.54%。

2.9重现性试验按拟定的含量测定方法，取同一批样品，分别制备5份供试品溶液，测龙胆苦苷的含量，结果RSD为0.96%。

2.10回收率试验取已知含量的样品（1.62m·g-1）6份适量，分别加入浓度为0.342g·L-1龙胆苦苷对照品2，2，2.5，2.5，3和3mL，按上述样品制备方法和色谱条件制备加样回收供试品溶液，并注入高效液相色谱仪，计算回收率，结果见表

表1回收率试验结果

试验号

制剂称样量∕g

制剂中龙胆苦苷∕mg

加入龙胆苦苷量∕mg

测得龙胆苦苷总量∕mg

回收率∕%

平均值∕%

RSD∕%

1

0.5001

0.8102

0.684

1.4781

97.6

97.3

0.67

2

0.5003

0.8105

0.684

1.4759

97.3

3

0.5012

0.8119

0.810

1.5989

98.4