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鹅细小病毒SRW株VP2基因克隆及原核表达的中期报告

鹅细小病毒SRW株VP2基因克隆及原核表达的中期报告

研究背景

鹅细小病毒(Gooseparvovirus，GPV)是一种引起鹅病毒性肝炎(gooseviralhepatitis，GVH)的致病性DNA病毒，目前已被纳入国家重点畜牧疫病监测计划。GPV属于小病毒科(Parvoviridae)，具有单链正向DNA，基因组大小大约为5kb，包括两个重叠的开放阅读框(ORF)，分别编码肽VP1和VP2。其中，VP2是病毒包膜蛋白，具有较强的免疫原性和保护性，因此对于GPV疫苗研发具有重要的意义。本研究旨在克隆鹅细小病毒SRW株VP2基因，并利用原核表达系统获得高纯度的重组蛋白。

研究方法

1.利用PCR方法从鹅细小病毒SRW株基因组中扩增VP2基因。

2.将PCR扩增产物纯化后，进行限制性酶切，将VP2基因插入到表达载体pET28a中。

3.将重组质粒pET28a-VP2转化到E.coliBL21(DE3)中，利用IPTG诱导VP2蛋白的原核表达。

4.利用尿素法纯化重组VP2蛋白，并进行SDS凝胶电泳检测纯度和分子量。

研究结果

1.成功从鹅细小病毒SRW株基因组中扩增出VP2基因。

2.通过限制性酶切将VP2基因插入到表达载体pET28a中，并测序验证插入正确性。

3.将重组质粒pET28a-VP2转化到E.coliBL21(DE3)中，成功诱导VP2蛋白的原核表达。

4.利用尿素法纯化重组VP2蛋白，并进行SDS凝胶电泳检测发现重组VP2蛋白预期大小为32kDa，纯度约为80%。

结论

本研究成功从鹅细小病毒SRW株基因组中克隆出VP2基因，利用原核表达系统获得了高纯度的重组VP2蛋白，为后续研究鹅细小病毒疫苗提供了基础。同时，该研究为其它小病毒科病毒的VP2蛋白的克隆和表达提供了参考。