A02细胞株中白血病耐药相关microRNA的筛选研究的开题报告.docxVIP

K562与K562/A02细胞株中白血病耐药相关microRNA的筛选研究的开题报告

一、研究背景与意义

白血病是一种恶性肿瘤，全球范围内的发病率与死亡率均有逐年增加的趋势。化疗是目前白血病治疗的主要手段，但是白血病患者的化疗耐药问题却一直是困扰医生和患者的难题。因此，研究白血病药物耐药的机制及其调控因素，对于治疗白血病这一疾病具有非常重要的意义。

MicroRNA是一类短链非编码RNA，参与许多生物过程的调控，如转录调控、RNA的剪接、RNA的定位和降解等。在各种细胞过程中，microRNA经常起到了一种生物调控分子的作用。近年来的研究发现，microRNA与癌症的发生发展密切相关，如在白血病中，某些microRNA的异常表达很可能是导致白血病细胞发展为药物耐药性的原因。因此，对于白血病中与耐药有关的microRNA进行筛选和研究，不仅可以深入了解癌症的发生发展机制，也可以为临床上药物治疗指导提供理论依据。

本研究将利用筛选肝癌患者外周血中的microRNA，并鉴定其中与癌症药物耐药相关的microRNA，进而研究其在白血病细胞耐药中的作用机制，为白血病的治疗提供一定的理论基础。

二、研究内容和拟解决的问题

1.研究目的

本研究旨在筛选出K562与K562/A02细胞株中与白血病耐药相关的microRNA，并探究其作用机制，为治疗白血病提供新的治疗方法和理论依据。

2.研究内容

（1）K562和K562/A02细胞株的筛选

K562和K562/A02细胞株将被用作本研究的研究对象，研究其之间的差异，并确定与耐药相关的K562/A02细胞株。该细胞株也将被用作后续的实验研究对象。

（2）microRNA的筛选

利用高通量测序技术，筛选出与K562/A02细胞株中白血病耐药相关的microRNA，并与K562细胞株进行比较，找出与K562/A02细胞株中显著上调的microRNA。

（3）筛选结果的验证

对筛选出来的与耐药相关的microRNA进行验证实验。通过体外细胞实验和体内小鼠移植瘤实验，验证其与耐药相关的表达水平，以及其对细胞增殖和细胞凋亡的作用。

（4）机制分析

进一步探讨筛选的或鉴定的microRNA对白血病耐药的作用机制。通过RNAi技术、基因组学、转录组学和蛋白质组学等技术手段，探讨microRNA在转录和转化中的作用机制。

3.拟解决的问题

本研究旨在筛选肝癌患者外周血中的microRNA，并鉴定其中与癌症药物耐药相关的microRNA，进而研究其在白血病细胞耐药中的作用机制，为白血病的治疗提供新的治疗方法和理论依据。具体来说，本研究拟解决以下问题：

（1）筛选出K562与K562/A02细胞株中与白血病耐药相关的microRNA；

（2）鉴定其在细胞增殖和凋亡中的作用；

（3）探究其转录、转化及调控机制；

（4）为治疗白血病耐药性提供新的理论和实践依据。

三、研究方法和技术路线

1.实验材料和设备

（1）细胞系：K562和K562/A02细胞株

（2）试剂：RPMI1640培养基、10％胎牛血清、TRIzolRNA提取试剂盒、cDNA合成试剂盒

（3）实验设备：高通量测序仪、逆转录PCR仪、膜式透析器、动态光散射仪等。

2.研究方法和技术路线

（1）将K562和K562/A02细胞株进行培养以及对其进行PCR鉴定；

（2）通过高通量测序技术，筛选出与K562/A02细胞株中白血病耐药相关的microRNA；

（3）通过指定的实验设计和分析方法，比较K562和K562/A02细胞株中microRNA的差异；

（4）筛选结果的验证，通过体外细胞实验和体内小鼠移植瘤实验，验证其与耐药相关的表达水平，以及其对细胞增殖和细胞凋亡的作用；

（5）机制分析，进一步探讨筛选的或鉴定的microRNA对白血病耐药的作用机制；

（6）撰写项目研究报告。