抗杂交鳢(Channaargus×C.maculate)弹状病毒卵黄抗体制备及ELISA检测方法的建立_NormalPdf.docxVIP

第54卷第6期海洋与湖沼Vol.54,No.6

2023年11月OCEANOLOGIAETLIMNOLOGIASINICANov.,2023

抗杂交鳢(Channaargus×C.maculate)弹状病毒卵黄抗体制备及ELISA检测方法的建立*

刘田1,2,3,4李硕2汪铭书4赵立宁2黄锦炉2吴艺琳2贾爱卿2①(1.农业农村部微生态资源养殖利用企业重点实验室广东广州511400;2.广东海大集团股份有限公司畜牧水产研究中心广东广州511400;3.广东海大畜牧兽医研究院广东广州511400;4.四川农业大学预防兽医研究所四川成都611100)

摘要为确定杂交鳢(Channaargus×C.maculate)弹状病毒卵黄抗体效价水平消减规律并验证抗体对病毒的中和能力,采用杂交鳢弹状病毒灭活疫苗免疫蛋鸡,使用醋酸-醋酸钠-辛酸法制备卵黄抗体,建立间接ELISA检测方法以监测卵黄抗体产生过程抗体水平消减情况,以中和试验评估卵黄抗体中和杂交鳢弹状病毒效果。结果显示,ELISA检测方法最佳条件为抗原包被浓度0.5×105.8TCID50/0.1mL,37°C包被2h,37°C封闭2h。与大口黑鲈蛙虹彩病毒卵黄抗体、SPF蛋黄提取物、免疫前蛋黄提取物以及MBC空细胞均无交叉反应。以S/N(sample/negative)2.1且敏感性最高为标准确定阳性、阴性样品。卵黄抗体于首免后28d产生效价,四免后达到最高水平,效价为1︰25600,平台期可持续40~60d,通过中和抗体检测结果证明平台期内抗体中和效价在免疫周期内最高,约为46.3。通过ELISA检测方法对卵黄抗体产生规律进行监测,通过中和检测方法评估卵黄抗体中和病毒效果。高滴度卵黄抗体具有被开发为新型抗杂交鳢弹状病毒生物制品的潜力,杂交鳢弹状病毒卵黄抗体的制备及快速检测方法的构建为该病的防治提供了理论基础和技术手段。

关键词杂交鳢弹状病毒;卵黄抗体;间接ELISA;中和抗体

中图分类号S942;Q955;S965doi:10.11693/hyhz20230500108

杂交鳢由乌鳢(Channaargus)和斑鳢(C.maculate)人工杂交而成,属于鲈形目(Perciformes),鳢科(Channidae)鱼类。该鱼分布广、繁殖力强,因其鱼骨刺少、鱼肉含量高且蛋白质滋补价值突出而具有极高的食用营养和药用保健价值(钟小庆等,2021;李元跃等,2022)。目前杂交鳢作为优特新品种已实现全人工高密度养殖,随着养殖密度的不断增加,细菌和病毒性传染疾病成为制约该品种鱼健康养殖的关键。2012年7月在广东省广州、佛山、中山、清远等多地发现一种可引起杂交鳢暴发性大规模死亡的疾病,给杂交鳢养殖业带来了严重的经济损失。曾伟伟等(2013)经病原学分析确定造成杂交鳢死亡的病原为弹状病毒,并将其定义为杂交鳢弹状病毒(Hybridsnakehead

rhabdovirus,HSHRV)。

鱼类弹状病毒毒株种类多、毒力强,是一类可使多种鱼出现高发病率和致死率的病毒病原体。已报道感染鱼类弹状病毒20多种,分布于诺拉弹状病毒属(Novirhabdovirus)和水泡性病毒属(Vesiculovirus)。HSHRV属于水泡性病毒属,为单股负链线性RNA病毒。该病毒呈典型子弹状,病毒粒子大小为60nm×160nm,具有L、G、N、P、M共5种主要结构蛋白(Einer-Jensenetal,2004;Tengetal,2007)。回归感染试验表明,发病鱼肝、脾、肾肿大且表面有出血点,鱼鳔表面血管肿胀、出血严重,死亡率达90%以上(曾伟伟等,2013)。HSHRV易自然感染苗期杂交鳢,死亡高