密斑刺鲀(Diodonhystrix)fshβ和lhβ基因的克隆及表达分析_NormalPdf.docxVIP

第54卷第6期海洋与湖沼Vol.54,No.6

2023年11月OCEANOLOGIAETLIMNOLOGIASINICANov.,2023

密斑刺鲀(Diodonhystrix)fshβ和lhβ基因的克隆及表达分析*

郭煜文李奕凯戴明姝

(广东省名特优鱼类生殖调控与繁育工程技术研究中心

梁隽浩黄彦霖李广丽陈华谱①

广东省海水养殖生物育种工程实验室广东海洋大学水产学院广东

湛江524088)

摘要密斑刺鲀(Diodonhystrix)是南海名特优鱼类,同时具备食用和中药保健价值,但目前关于密斑刺鲀生殖生理的研究较少,影响了该鱼繁育理论研究的发展。众所周知,促性腺激素(Gonadotropichormone,GtH)是生殖调控的关键激素之一,在生殖调控轴中发挥着承上启下的作用。利用转录组分析及分子克隆技术从密斑刺鲀中克隆并鉴定出fshβ和lhβ基因的cDNA序列,通过生物信息学分析,发现密斑刺鲀fshβcDNA开放阅读框共363bp,编码120个氨基酸;lhβcDNA开放阅读框共420bp,编码139个氨基酸。通过序列比对和系统进化树分析,表明密斑刺鲀Fshβ和Lhβ均与鲀科类的鱼的亲缘关系较近。利用三级结构分析,发现Fshβ的三级结构相对保守,而Lhβ的三级结构差异较大。利用实时荧光定量的方法检测了密斑刺鲀fshβ和lhβ基因的组织分布情况,结果表明密斑刺鲀fshβ和lhβ在垂体的表达量最高,其次是性腺。此外,进一步检测了fshβ和lhβ基因在雌雄性腺发育过程中的表达模式,发现垂体中fshβ基因伴随性腺的发育,表达量逐渐下降,而lhβ基因的表达量呈逐渐增加模式。研究结果将为构建密斑刺鲀生殖调控网络提供研究基础。

关键词密斑刺鲀;fshβ;lhβ;分子克隆;表达模式

中图分类号S965.3doi:10.11693/hyhz20230400098

在下丘脑-垂体-性腺(HPG)生殖调控轴中,垂体是中间节点,其分泌的促性腺激素(Gonadotropichormone,GtH)是介导生殖调控的重要分子,并在生殖轴中起到承上启下的关键作用。促性腺激素,包括卵泡刺激素(follicle-stimulatinghormone,Fsh)和黄体生成素(luteinizinghormone,Lh)。Fsh和Lh均为异二聚体、非共价结合的糖蛋白,由一个相同的α亚基和一个激素特异性β亚基组成。每个亚基都由独立的基因编码(Pierceetal,1981;Fiddesetal,1984)。在哺乳动物中,Fsh和Lh由同一种促性腺激素细胞产生(Nakane,1970),但在硬骨鱼类中,Fsh和Lh主要由存在于硬骨鱼脑垂体远侧部和中间部的不同的细胞群合成和分泌(Weltzienetal,2003;Zhouetal,2010),

这表明硬骨鱼类的Fsh和Lh具有不同的分泌调节机制和生理调控功能(Kimetal,2005)。

目前,Fsh和Lh已在欧洲鳗鲡(Anguillaanguilla)、日本鳗鲡(A.japonica)、大西洋鲑(Salmosalar)和草鱼(Ctenopharyngodonidella)等多种硬骨鱼类中克隆和鉴定,并开展了分子结构和表达分析(Changetal,1988,1990;Deganietal,2003;Kimetal,2005;Jengetal,2007;Banerjeeetal,2008;Zhouetal,2010)。Fsh和Lh主要是受到来源于下丘脑神经元的促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasinghormone,GnRH)的刺激而合成与释放,释放后的Fsh和Lh分