实验改良氏法测蛋白含量.pptVIP

关于实验改良氏法测蛋白含量实验室规则按规章操作，保障实验安全；进入实验室要着白大衣；禁止大声喧哗，保持实验环境的安静；维持实验室的整洁。第2页,共21页，2024年2月25日，星期天?实验课的考试?实验分组?实验室卫生?实验报告的书写第3页,共21页，2024年2月25日，星期天实验名称姓名：班级：学号：实验原理：实验目的：实验步骤：文字简洁，尽可能采用图表实验结果：原始数据、计算过程、结论实验讨论：结果分析、实验注意事项实验日期：同组人员：实验报告的书写第4页,共21页，2024年2月25日，星期天一、玻璃仪器的常规清洗二、试剂瓶、吸量管、试管的放置基本操作三、刻度吸量管的使用第5页,共21页，2024年2月25日，星期天分光光度计分光光度计的原理分光光度计的操作第6页,共21页，2024年2月25日，星期天T=I/I0，A=-lgT1、A1/A2=c1/c22、标准曲线法Lambert-Beer定律A=KcL分光光度计的原理I0ILK：吸光系数c：溶液浓度L：溶液厚度C第7页,共21页，2024年2月25日，星期天光源I0I单色器样品池狭缝检测系统分光光度计的构造第8页,共21页，2024年2月25日，星期天分光光度计的使用1.打开电源，调节旋钮至需要的波长，预热20~30min2.1档（空白管），T模式调100%，显示“Blank”、“100”3.拉杆拉至1.5档，T模式调0%，显示“0.00”4.切换到A模式，拉至2、3、4档，读取各个样品的吸光度5.使用完毕后，置于休息档（1.5档）拉杆，1-4档样品池读数波长第9页,共21页，2024年2月25日，星期天1档，空白对照，A=0，T=100%1.5档，隔板，A=+∞，T=0%2档，样品1，A=？3档，样品2，A=？4档，样品3，A=？第10页,共21页，2024年2月25日，星期天1、分清光面、毛面手只可接触毛面，光线须从光面通过2、用溶液润洗2-3次，装至2/3至4/5体积3、粗纸吸水、柔纸擦亮光面4、从低到高依次测量，不需清洗比色杯5、蒸馏水冲洗3-5次，擦干，倒扣放置比色皿的使用毛面光面第11页,共21页，2024年2月25日，星期天改良Lowry氏法测定蛋白质含量实验1第12页,共21页，2024年2月25日，星期天实验目的1、学习改良Lowry氏法测定蛋白质含量的原理及方法2、了解标准曲线在物质定量测定中的应用及绘制要点第13页,共21页，2024年2月25日，星期天实验原理凯氏定氮法16%紫外吸收280nm呈色反应第14页,共21页，2024年2月25日，星期天Pr.Cu2+OH-Pr-Cu2+螯合物(紫红色)酚试剂钼蓝-钨蓝混合物(蓝色，深浅与蛋白含量呈正比)（双缩脲反应）Pr.Cu2+改良Lowry法第15页,共21页，2024年2月25日，星期天费时较长，而且要精确控制操作时间。显色程度与时间有关。专一性较差，干扰物质较多。灵敏度高双缩脲法的检出限为0.2~1.7mg/ml，而本法的检出限为0.015~0.110mg/ml。优点缺点第16页,共21页，2024年2月25日，星期天实验步骤试剂（ml）蛋白标准品样品测定管012345Pr标准液00.10.20.40.60.8待测血清1.0生理盐水1.00.90.80.60.40.20试剂A0.9ml,混匀后，37℃水浴10min试剂B0.1ml,混匀后，室温放置10min试剂C3ml,立即混匀，37℃水浴10min第17页,共21页，2024年2月25日，星期天0x1x2x3x4Y3OD650蛋白质量（mg）/蛋白浓度（mg/ml）1、标准曲线的绘制和实测样本浓度的求得Y2Y1样品吸光度样品浓度实验结果第18页,共21页，2024年2月25日，星期天2、浓度换算样品体积实测蛋白质量待测蛋白浓度（g/L）=实测蛋白浓度╳稀释倍数待测蛋白浓度（g/L）=