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相同点:长度都约22nt左右;同是Dicer产物,因此具有Dicer产物的特点;二者生成都需Argonaute家族蛋白的存在;同是RISC的组分。miRNA与siRNA比较第63页,共75页,2024年2月25日,星期天来源不同:siRNA来源于转基因或病毒RNA,由长dsRNA转变而来;miRNA来源于内源转录本,是细胞内RNA的固有组分之一,由具有发夹状结构的pre-miRNA转变而来;结构不同:siRNA主要以双链形式存在,其3’端存在2个非配对的碱基,通常为UU;miRNA主要以单链形式存在;对靶RNA的特异性不同:siRNA与靶mRNA完全互补配对结合;miRNA与靶RNA并不完全互补,存在错配现象。靶序列有一个核苷酸突变,就会影响到siRNA的作用功能,但不会影响到miRNA的功能;作用形式不同:siRNA主要在转录后通过降解mRNA发挥作用,而miRNA只在蛋白质翻译水平上负调控靶基因的表达。不同点:第64页,共75页,2024年2月25日,星期天(四)、RNA干扰的研究方法一般技术路线第65页,共75页,2024年2月25日,星期天(五)、RNA干扰的应用1.基因功能研究由于RNAi具有高度的序列专一性和有效的干扰活力,可以特异地使特定基因沉默,获得功能丧失或降低突变,因此可以作为功能基因组学的一种强有力的研究工具。已有研究表明RNAi能够在哺乳动物中抑制特定基因的表达,制作多种表型,而且抑制基因表达的时间可以控制在发育的任何阶段,产生类似基因敲除的效应。与传统的基因敲除技术相比,这一技术具有投入少,周期短,操作简单等优势,近来RNAi成功用于构建转基因动物模型的报道日益增多,标志着RNAi将成为研究基因功能不可或缺的工具。第66页,共75页,2024年2月25日,星期天2.病毒性疾病的治疗使用RNAi技术来阻止艾滋病病毒进入人体细胞。某研究小组设计合成的lenti病毒载体引入siRNA,激发RNAi使其抑制了HIV-1的coreceptor-CCR5(化介素受体,HIV-1的辅因子)进入人体外周T淋巴细胞,而不影响另一种HIV-1主要的coreceptor-CCR4,从而使以lenti病毒载体为媒介引导siRNA进入细胞内产生了免疫应答,由此治疗HIV-1和其他病毒感染性疾病的可行性大大增加。——艾滋病第67页,共75页,2024年2月25日,星期天2.病毒性疾病的治疗Shlomai和Shaul设计了各针对HBV基因19nt的两种pSUPER载体:pSUPERX-siRNA和pSUPERcore-siRNA。已转染含1.3XwtHBV基因质粒载体的Huh7细胞再被X-siRNA或core-siRNA转染后,core蛋白水平分别降低了89%、63%,转染X-siRNA的细胞中HBsAg降低60%,但转染core-siRNA对HBsAg表达无明显影响(X-siRNA干扰沉默了所有的病毒转录物,而core-siRNA仅沉默3.5kb、3.9kb的mRNA)。——HBV(乙肝病毒)第68页,共75页,2024年2月25日,星期天2.病毒性疾病的治疗Randall等证明了针对HCVRNA的siRNA转染细胞4天后可使细胞质中复制的HCVRNA降低80倍;将siRNA转染至已有HCV感染、复制的细胞,siRNA对98%以上可检测到HCV抗原、HCV复制活跃的细胞有抑制作用;siRNA干扰沉默HCVRNA具有剂量依赖性和序列特异性。Kapadia等也证明了siRNA特异抑制HCVRNA复制、阻止相关蛋白表达的作用。——HCV(丙肝病毒)第69页,共75页,2024年2月25日,星期天2.病毒性疾病的治疗RNAi还可应用于其它病毒感染如脊髓灰质炎病毒等,siRNA已证实介导人类细胞的细胞间抗病毒免疫,用siRNA对Magi细胞进行预处理可使其对病毒的抵抗能力增强。严重急性呼吸综合征(severeacuterespiratorysyndrome,SARS)的防治研究,RNAi也受到了重视。siRNA在感染的早期阶段能有效地抑制病毒的复制,病毒感染能被针对病毒基因和相关宿主基因的siRNA所阻断,这些结果提示RNAi能胜任许多病毒的治疗。——脊髓灰质炎病毒/SARS第70页,共75页,2024年2月25日,星期天3.肿瘤治疗用RNAi特异性地抑制癌基因、癌相关基因或突变基因的过度表达,使这类基因保持在静默或休眠状态,从而有望用这种新的手段治疗各种恶性肿瘤。(1)RNAi可应用于敲除点突变激活的癌基因。(2)RNAi可应用于抑制插入基因及融合基因的表达。(3)RNAi可应用于抑制基
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