发酵工业微生物菌种制备原理和技术.ppt

************已获得某种生产能力的纯菌种，为提高其生产能力或者防止菌种退化，工业上就需要不断进行育种达到筛选优良菌种或者复壮的目的。********************************************通过宿主体内生长进行复壮。对于寄生性微生物的退化菌株，可通过接种至相应的昆虫或动、植物宿主体内的措施来提高它们的致病性。淘汰已衰退的个体，如低温抗性筛选。第127页,共151页，2024年2月25日，星期天第三节工业微生物种子的扩大培养种子扩大培养的目的与要求种子制备实例种子制备的技术概要第128页,共151页，2024年2月25日，星期天种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。一、种子扩大培养的目的与要求1、种子扩大培养的概念:第129页,共151页，2024年2月25日，星期天2、种子扩大培养的方法:液体培养法：包括液体试管、三角瓶摇床振荡或回旋式培养。摇瓶通气量大小与摇瓶机型式、转数、振程(或偏心距)、三角瓶容量、装料量有关。表面培养法：包括茄子瓶、克氏瓶或瓷盘培养。固体培养法：包括三角瓶、蘑菇瓶、克氏瓶、培养皿等麸皮培养。第130页,共151页，2024年2月25日，星期天3、种子扩培的目的接种量的需要菌种的驯化缩短发酵时间、保证生产水平第131页,共151页，2024年2月25日，星期天4、种子的要求：总量及浓度能满足要求生理状况稳定，能保持稳定的生产性能活力强，移种至发酵后，能够迅速生长无杂菌污染第132页,共151页，2024年2月25日，星期天二、种子制备的技术概要1、种子制备的过程沙土管孢子冷冻干燥孢子斜面孢子培养摇瓶液体培养茄子瓶斜面培养固体培养基培养一级种子罐培养二级种子罐培养三级种子罐培养发酵罐（1）种子制备的工艺流程第133页,共151页，2024年2月25日，星期天第134页,共151页，2024年2月25日，星期天实验室阶段：不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因此形象地将这些培养过程称为实验室阶段的种子培养。生产车间阶段：种子培养在种子罐里面进行，一般在工程归为发酵车间管理，因此形象地称这些培养过程为生产车间阶段。第135页,共151页，2024年2月25日，星期天（1）培养物选择的原则目的：种子扩培到一定的量和质，根据菌种的特点最终的培养物可分为两类：对于不产孢子和芽胞的微生物——获得一定数量和质量的菌体2、实验室种子制备第136页,共151页，2024年2月25日，星期天获得一定数量和质量的孢子对于产孢子的微生物获得一定数量和质量的菌丝体便于操作，但需要更仔细的控制。第137页,共151页，2024年2月25日，星期天（2）培养基选择的原则培养基的选择应该是有利于菌体的生长，对孢子培养基应该是有利于孢子的生长。在原料方面，实验室种子培养阶段，规模一般比较小，因此为了保证培养基的质量，培养基的原料一般都比较精细。第138页,共151页，2024年2月25日，星期天（3）起始接种物的传代问题细菌保藏斜面→活化斜面产孢子保藏→母斜面→子斜面目的：使菌种的传代次数尽可能的少。第139页,共151页，2024年2月25日，星期天母瓶：活化、纯化，使保藏菌种生长，并去除变异株。所以接种时要稀一点、便于纯化生长到单菌落。子瓶:大量繁殖，得到大量孢子。接种：①从母斜面上点接种，选取生长好的单菌落②接种时密一点，得到大量的孢子。孢子培养时注意湿度，子斜面使用一般不超过1个月孢子培养第140页,共151页，2024年2月25日，星期天3、生产车间阶段(1)培养物的选择原则在生产车间阶段，最终一般都是获得一定数量孢子或摇瓶菌丝体移种至种子罐扩大培养。（2）培养基选择的原则目的：获得一定数量和质量的菌体，因此培养基的选择应首先考虑的是有利于孢子的发育和菌体的生长，所以营养要比发酵培养基丰富。在原料方面：不如实验室阶段那么精细，而是基本接近于发酵培养基，这有两个方面的原因:一是成本二是驯化第141页,共151页，2024年2月25日，星期天例：柠