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掌握细菌常用标本片的制作及染色方法;
认识革兰氏染色的反应特性;;;;固体培养物:取清洁载玻片一块,用吸管吸取生理盐水1滴置于玻片中央,再将接种环在火焰上灭菌,待冷后从固体培养基上挑取少许菌落,置于玻片上的生理盐水中混均匀,并在玻片上涂成直径约为1cm的涂面,要求薄而均匀。;液体培养物:取清洁载玻片一块,将接种环在火焰上灭菌,待冷后取一滴培养液或液体,置于玻片中央,混均匀,涂成直径约为1cm的涂面。
病变组织抹片:做无菌切开,用切面在玻片中央触一下或压印成一薄层即可。;在室温下自然干燥,必要时将涂面向上,置火焰上方30~40cm来回微烤使其干燥。;;(二)血液推片的制作;1.取血:将血液滴在载玻片上。
;2.推片:以左手拿该片,用另一个载玻片作推片,在左手载玻片上由前向后接触血滴,使两载玻片约成45°角,轻轻移动,使血滴成一直线,然后由前向后推为一均匀的薄片。;3/24/2024;;3/24/2024;3/24/2024;做细菌涂片时,不宜涂得过厚,以免影响制片效果。
固定必须确实,火焰固定时不宜温度过高,以免破坏菌体结构。
每种染液染色的过程中应保持染色液不干,尤其加热染色的染液,在染色过程中应随时添加,以免蒸发干,影响染色效果。
每种染液染色后,应用水将染液一起冲掉,不可先将染液倾去后再用水冲洗。;细菌标本片制备及染色方法
;掌握细菌常用标本片的制作及染色方法;
认识革兰氏染色的反应特性;;;;固体培养物:取清洁载玻片一块,用吸管吸取生理盐水1滴置于玻片中央,再将接种环在火焰上灭菌,待冷后从固体培养基上挑取少许菌落,置于玻片上的生理盐水中混均匀,并在玻片上涂成直径约为1cm的涂面,要求薄而均匀。;液体培养物:取清洁载玻片一块,将接种环在火焰上灭菌,待冷后取一滴培养液或液体,置于玻片中央,混均匀,涂成直径约为1cm的涂面。
病变组织抹片:做无菌切开,用切面在玻片中央触一下或压印成一薄层即可。;在室温下自然干燥,必要时将涂面向上,置火焰上方30~40cm来回微烤使其干燥。;;(二)血液推片的制作;1.取血:将血液滴在载玻片上。
;2.推片:以左手拿该片,用另一个载玻片作推片,在左手载玻片上由前向后接触血滴,使两载玻片约成45°角,轻轻移动,使血滴成一直线,然后由前向后推为一均匀的薄片。;3/24/2024;;3/24/2024;3/24/2024;(三)常用的细菌染色方法;(三)常用的细菌染色方法;(三)常用的细菌染色方法;(2)瑞氏染色法:;染色方法:细菌抹片自然干燥后,滴加瑞氏染色液于涂片上以固定标本,1~3min后,再滴加与染色液等量的磷酸缓冲液或中性蒸馏水于玻片上,轻轻摇晃使与染色液混和均匀,5min左右水洗,干后镜检,结果菌体呈蓝色,组织细胞等物呈其他颜色。;2.复染;2.复染;革兰氏染色;涂片→干燥→固定→草酸铵结晶紫染色1min→水洗干燥→碘液媒1min→水洗干燥→95%乙醇脱脂15~20s→水洗干燥→番红复染1min→水洗干燥→镜检。;染色步骤;(1)涂片→干燥→固定;固定的目的和方法;(2)草酸铵结晶紫染色1min→水洗干燥;结晶紫初染1分钟水洗;(3)碘液媒染1min水洗→干燥;碘液媒染1分钟;(4)95%乙醇脱色15~30秒→水洗干燥;酒精脱色30秒;(5)番红复染30S~1min→水洗干燥→镜检;番红复染30秒;做细菌涂片时,不宜涂得过厚,以免影响制片效果。
固定必须确实,火焰固定时不宜温度过高,以免破坏菌体结构。
每种染液染色的过程中应保持染色液不干,尤其加热染色的染液,在染色过程中应随时添加,以免蒸发干,影响染色效果。
每种染液染色后,应用水将染液一起冲掉,不可先将染液倾去后再用水冲洗。;普通琼脂培养基的配制
;掌握普通琼脂培养基的配制;;材料:牛肉膏3g,蛋白胨10g,氯化钠5g,琼脂20g。
制备:将上述材料装入1000mL烧杯中,煮沸,使琼脂充分溶化,趁热用2-4层纱布过滤,补充蒸馏水至1000mL,测定PH7.4-7.6。高压灭菌(121℃,,30min)后,于无菌室或超净台内分装(试管每管约1/3高,倾斜冷却;平皿厚度2-3mm,水平静置冷却)。;样品的称量:天平的正确使用;称取蛋白胨应迅速。
定容方法的准确。;实验操作:每小组称取3.3g营养琼脂装入100mL烧杯中,煮沸,使琼脂充分溶化,趁热用2-4层纱布过滤,补充蒸馏水至100mL。高压灭菌(121℃,,20min)后,于无菌室或超净台内趁热分装(平皿厚度2-3mm,
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