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Twist基因干扰抑制视网膜新生血管细胞转型的机制研究的开题报告

1.研究背景和意义：

在糖尿病性视网膜病变（diabeticretinopathy,DR）中，异常的视网膜新生血管（retinalneovascularization,RNV）导致了视力下降和失明，是DR最常见的病理改变。Twist是一种重要的转录因子，可以调节细胞增殖、分化和转型等生物学过程，其在多种肿瘤中表现出过度表达，参与了肿瘤的发生和发展。近年来，Twist在RNV中的表达也得到了广泛的关注，与RNV的发生和维持密切相关。因此，研究Twist在RNV中的表达及机制，对于深入了解RNV发生的病理生理学基础，以及为DR的治疗提供新的思路和方法具有重要意义。

2.研究内容和目标：

本研究拟借助RNA干扰技术，探究Twist在RNV中的表达变化及其对RNV细胞转型过程的影响，旨在从分子水平上揭示Twist调节RNV发生的机制。

具体实验内容：

1）构建Twist基因干扰载体，并通过细胞实验验证其对Twist的干扰效果。

2）观察Twist基因干扰对RNV细胞增殖、迁移和AP-1信号通路的影响。

3）利用细胞学和分子生物学方法，进一步明确Twist基因干扰是否能够抑制RNV细胞的转型，以及其对与RNV发生相关信号通路的影响。

3.研究方法：

本研究将采用以下方法进行：

1）Twist基因干扰载体的构建：利用RNA干扰技术，设计并合成特异性Twist小干扰RNA（siRNA）序列，构建Twist基因干扰载体。

2）细胞实验：选择糖尿病小鼠模型视网膜原代培养的新生血管内皮细胞（retinalmicrovascularendothelialcells,RMVECs）作为研究对象，利用Twist基因干扰载体转染RMVECs细胞，观察Twist基因干扰效果及对细胞增殖、迁移的影响。

3）Westernblotting：利用Westernblotting方法检测干扰Twist基因后与RNV细胞诱导有关的信号通路蛋白在细胞中的表达变化。

4.研究预期结果和意义：

1）成功构建Twist基因干扰载体，验证其对Twist的干扰效果。

2）通过细胞实验观察，发现Twist基因干扰可抑制RMVECs细胞的增殖和迁移，说明Twist在RNV细胞转型过程中发挥了重要作用。

3）分子生物学水平的分析将进一步提高我们对RNV发生及Twist的功能机制的认识，为DR的治疗提供新的靶点和治疗方案。

4）本研究成果对于揭示DR的基本病理生理学及TWIST的生物学功能具有一定程度的理论价值，拟发表SCIE期刊论文，为科学研究和临床治疗提供新思路和方法。