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等离子体臭氧对空气中微生物的杀灭效果研究

作者：顾春英 薛广波 居喜娟关键词：等离子体-臭氧；消

提要 目的：探讨急性低氧油酸肺损伤大鼠肺组织中SP-A和SP-B的表达，明确SP-A和SP-B在肺表面活性物质(PS)中的作用，及其对该系统的影响。方法：采用低氧大鼠油酸肺损伤模型及免疫组化技术，采用己酮可可碱对急性肺损伤进行干预。结果：SP-A和SP-B在肺内的表达主要以肺泡Ⅱ型上皮细胞为对象，SP-B的特异性较SP-A高。肺泡腔和小支气管腔内可见一层免疫阳性物质沉着，肺泡Ⅱ型上皮细胞多位于肺泡隔部和角部并靠近肺泡腔。己酮可可碱可使SP-A蛋白表达增加。结论：SP-A和SP-B在肺内的表达主要以肺泡Ⅱ型上皮细胞为对象，气道上皮和血管内皮以及间质细胞均未见明显的表达，SP-B的特异性较SP-A高。急性低氧油酸肺损伤时，肺组织SP-A和SP-B免疫组化显示肺泡Ⅱ型上皮细胞的表达明显减弱。己酮可可碱可使SP-A蛋白表达增加。

急性肺损伤或急性呼吸窘迫综合征的发病机制非常复杂，自1967年Ashbaugh首次报道以来，已经被人们充分认识，其临床特征主要有三大特点：难以纠正的低氧血症、肺顺应性降低和X线胸片的弥漫性浸润。尽管试用各种药物，从炎症介质入手试图改善ARDS患者的预后，但至今均未获得满意的结果，其病死率一直维持在50%～70%，充分说明现有的治疗手段存在不足［1］。近年研究表明，外源肺表面活性物质(Pulmonarysurfacant,PS)替代治疗对防止ARDS发生或减轻其病情、促进肺功能恢复有显著作用［2，3］。同样有资料证明ARDS患者存在内源性PS系统的异常［4］。PS各种表面活性指标的异常，其程度与ARDS病情呈线性关系。不同类型的ARDS动物模型在病变早期即有PS的异常变化［5］。由此，ARDS的PS系统功能的异常及其作为肺损伤过程中的重要内在因素，目前已得到公认。为

了进一步明确近年发现的表面活性蛋白 A(SurfactantproteinA,SP-A)和表面活性蛋白B(SurfactantproteinB,SP-B)在PS中的作用，及其对PS系统的影响，本实验拟观察急性低

氧大鼠油酸肺损伤肺组织中SP-A和SP-B的表达。

1、材料与方法

实验用雄性Wistar大鼠18只，分为正常对照组(对照组)、急性低氧肺损伤组(实验组)和急性低氧肺损伤+己酮可可碱干预组(治疗组)。动物模型的复制：雄性Wistar大鼠，体重(250±30)g，放入低压仓内，匀速减压至海拔6000m，持续12h。然后从颈外静脉注入

油酸复制急性肺损伤模型，并用药物(己酮可可碱)进行处理。试验组、治疗组和对照组各取

6只大鼠右下肺膈叶，10%福尔马林固定，待检查。

肺组织SP-A和SP-B免疫组织化学检测［6］。免疫组化用LSAB组合试剂盒，珠海经济特区生化药品公司，广东。

SP-A，SP-B多克隆抗体：美国俄亥俄州儿童医学中心Whitsett教授惠赠。

标本的制备

常规留取肺组织标本，10%福尔马林液固定，石蜡包埋切片，片厚4μm。置40%甲醛明胶包被载玻片上。

操作步骤

按试剂盒说明书进行，同时设阴性对照。①二甲苯脱蜡，常规酒精至水，重新湿化组织切片。②3%H2O2孵育5min以消除内在过氧化酶反应。③用蒸馏水冲洗，再置Tirs缓冲液浸泡5min。④加入1∶20稀释的正常猪血清(阻断剂)，37°C孵育20min。⑤擦去载玻片上多余的水分和猪血清。⑥分别加入1∶800稀释的SP-A和SP-B多克隆抗体20μl，室温孵育30min。⑦用0.01mol/LPBS缓冲液冲洗载玻片并浸泡10min。⑧加1∶400倍稀释的生物素

标定的猪抗兔免疫球蛋白(联接剂)，37°C孵育30min。⑨PBS洗片10min。 10 加1∶400

倍稀释过氧化物酶标定抗生链菌素(Streptavidin)20μl,37°C30min。重复步骤⑦。11加DAB基质液(DAB6mg10mlTris*ClpH7.6,0.1ml3%H2O2，过滤后使用)10μl室温孵育10min。12以蒸馏水冲洗，苏木精-伊红复染。中性树胶封片，光镜观察，照相。

2、结果

结果表明：①实验组和对照组的SP-A和SP-B在肺内的表达主要以肺泡Ⅱ型上皮细胞为对象，气道上皮和血管内皮以及间质细胞均未见明显的SP-A和SP-B蛋白的表达。从肺泡Ⅱ型上皮细胞表达的特异性看，SP-B的特异性较SP-A高。肺泡Ⅱ型上皮细胞，