(2.10)--第02章-4 核酸的理化性质.ppt

目录目录目录目录核酸的理化性质ThePhysicalandChemicalCharactersofNucleicAcid核酸的酸碱性质核酸为多元酸，具有较强的酸性。核酸的高分子性质粘度：DNARNAdsDNAssDNA沉降行为:不同构象的核酸分子的沉降速率有很大差异，这是超速离心法提取和纯化核酸的理论基础。核酸在波长260nm处有强烈的吸收，是由碱基的共轭双键所决定的。一、核酸分子具有强烈的紫外吸收五种碱基的紫外吸收光谱DNA或RNA的定量A260=1.0相当于50μg/ml双链DNA(dsDNA)40μg/ml单链DNA(ssDNAorRNA)20μg/ml寡核苷酸确定样品中核酸的纯度 纯DNA:A260/A280=1.8 纯RNA:A260/A280=2.0紫外吸收的应用二、DNA变性是双链解离为单链的过程在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。定义DNA变性的本质是双链间氢键的断裂。协同性的DNA解链高温或极端的pHDNA的变性方法：过量酸，碱，加热，变性试剂如尿素、酰胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等。部分变性DNA的电镜图像DNA变性的增色效应dsDNAssDNA在DNA变性过程中，它在260nm处的OD值会发生增加。这种变化称为增色效应(hyperchromiceffect)。DNA的解链曲线连续加热DNA的过程中以温度相对于A260值作图，所得的曲线称为解链曲线。解链过程中，紫外吸光度的变化达到最大变化值的一半时所对应的温度。解链温度(meltingtemperature，Tm)G+C含量越高，解链温度就越高。解链曲线的变化三、变性的核酸可以复性或形成杂交双链当变性条件缓慢地除去后，两条解离的互补链可重新配对，恢复原来的双螺旋结构，这一现象称为DNA复性(renaturation)。减色效应：DNA复性时，其溶液OD260降低。热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，这一过程称为退火(annealing)。核酸分子杂交(hybridization)核酸分子杂交研究DNA分子中某一种基因的位置。鉴定两种核酸分子间的序列相似性。检测某些专一序列在待检样品中存在与否。核酸分子杂交的应用大家好，现在我们一起学习核酸的理化性质。*核酸为多元酸，具有较强的酸性。DNA和RNA都是线性高分子，因此它们在溶液的粘度很大，RNA的长度远远小于DNA,因此RNA的粘度小于DNA。而单链DNA的粘度小于双链DNA.溶液中的核酸分子在引力场中可以沉淀，不同构象的核酸分子的沉降速率有很大差异，这是超速离心法提取和纯化核酸的理论基础。*嘌呤碱基和嘧啶碱基都有共轭双键，所以都具有强烈的紫外吸收。通过这个图我们可以看出5种碱基的最大吸收峰在260nm附近。因此核酸在波长260nm处有强烈的吸收性质。*核酸的紫外吸收特性常用作核酸的定性和定量分析。A260=1.0相当于50μg/ml双链DNA(dsDNA)或40μg/ml单链DNA或者RNA、也相当于20μg/ml寡核苷酸。根据260nm与280nm的吸光度比值，还可以确定样品中核酸的纯度：纯DNA的A260与A280比值为1.8，纯RNA:A260与A280比值为2.0。**DNA变性是DNA的重要理化性质。在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程称为DNA变性。DNA变性的本质是双链间氢键的断裂。*在某些理化因素，如过量酸，碱，加热等的作用下,一条双链DNA中碱基对之间的氢键会断裂,解离成为两条单链DNA。应当注意的一点是DNA的变性破坏了DNA的空间结构，但是没有改变它的核苷酸序列。这是部分变性DNA的电镜图像。*在DNA解链过程中，由于有更多的共轭双键得以暴露，所以含有DNA的溶液在260nm处的吸光度随之增加，这种现象称为DNA的增色效应。它是检测DNA双链是否发生变性的一个最常用的指标。*在实验室内，最常用的使DNA变性的方法之一是加热，如果以温度相对于A260作图，所得的曲线称为DNA的解离曲线。从曲线中可以看出，DNA双链从开始解链到完全解链，是在一个相当窄的温度范围内完成的。在解链的过程中，紫外吸光度的变化?A260达到最大变化值一半时所对应的温度定义为DNA的解链温度或融解温度简称为Tm。在此温度时，50%的DNA双链解离成为单链。*Tm与DNA的长短及G+C含量有关，G+C比例越高，Tm越高。*变性的核酸可以复性或形