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Masson染色(2010-09-0214:43:20

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标签:杂谈分类:实验日志masson染色原理Masson三色法

(根据Masson,1929

试剂配制

(一Weigert氏铁苏木素液(见苦味酸——酸性品红法(二丽春红酸性品红液

丽春红(Ponceau2R0.7g酸性品红(acidfuchsin0.3g蒸馏水99ml

冰醋酸(glacialaceticacid1ml(三1%磷钼酸水溶液

磷钼酸(phosphomolybdicacid1g

蒸馏水加至100ml(四2%苯胺蓝液

苯胺蓝(anilineblue2g

冰醋酸(glacialaceticacid2ml

蒸馏水加至100ml(五亮绿液

亮绿(lightgreen1g

蒸馏水99ml

冰醋酸(glacialaceticacid1ml

操作方法

组织固定于Bouin氏液或Zenker氏液,流水冲洗一晚,常规脱水包埋。

切片脱蜡至水。

如用Zenker氏液固定者,应进行除汞处理,其步骤如下:(1切片脱蜡后于0.5%碘酒精作用10分钟。

(2稍水洗

(35%硫代硫酸钠作用5分钟。(4流水冲洗10分钟

Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。

流水稍洗。

1%盐酸酒精分化。

流水冲洗数分钟。

丽春红酸性品红液染5-10分钟。

蒸馏水稍冲洗。

1%磷钼酸水溶液处理约5分钟。

不用水洗,直接用苯胺蓝液或绿液复染5分钟。

11.1%冰醋酸处理1分钟。

12.95%酒精脱水多次。

13.无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固结果:

胶原纤维虽蓝色(用苯胶蓝液复染或绿色(用亮绿复染。胞质、肌纤维和红细胞

红色。胞核蓝褐色。注意事项:

组织用Bouin氏液或Zenker氏液固定为佳。如已用10%甲酸液固定,切片可

在脱蜡至水后.再放入Bouin氏液作用一晚或置37。C温箱内1-2小时,然后流水冲洗切片至黄色消失再进行染色。

铁苏木素染核(见苦味酸一酸性品红法。

如没有丽春红染料,可把酸性品红加至1克来配制。

用1%磷钼酸处理时可在镜下控制.见肌纤维呈红色,胶原纤维呈淡红色即可。染色原理:

上面介绍的胶原纤维染色如苦味酸-酸性品红法和三色染色法,都是利用两种或

三种阴离子染料混合一起或先后作用而完成鉴别染色的。VanGieson氏染色中,为什么胶原纤维呈红色(被酸性品红所染,肌纤维呈黄色(被苦味酸所染.而Masson氏染色时胶原纤维呈蓝色(被苯胺蓝所

染,肌纤维呈红色(被酸性品红和丽春红所染,这与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。组织的渗透性(Permeability,取决于组织的结构密度。如果细致地观察,会发现组织和细胞成分都

是多孔的构造。不同的组织和细胞成分,它们的孔隙大小是不同的。孔隙的大小,决定了组织的渗透性。如孔隙小,组织结构致密,渗透性低;孔隙宽,组织结构疏松,渗透性高。如已固定的组织用一系列阴离子水溶性染料先后或混合染色,则可发现红细胞被最小分子的阴离子染料着染.肌纤维与胞质被中等大小的阴离子染料着染,而胶原纤维则被大分子的阴离子染料着染。由此说明了红细胞对阴离子染料的渗透性最小,肌纤维与胞质次之,而胶原纤维具有最大的渗透性。根据组织不同的渗透性能,选择分子大小不同的阴离子染料进行染色,便可把不同组织成分显示出来.

染料分子的大小,主要由其分子量来体现。小分子量者易于穿透结构致密、渗透性低的组织,而大分子最者则只能进入结构疏松,渗透性高的组织。一般来说,结构疏松,渗透性高的组织多选择大分子染料,而结构致密,渗透性低的组织多选择小分子染料。常用作胶原纤维染色的几种阴离子染料的分子量由小到大分别是:

苦味酸(黄色,分子量,229.11橙黄G(橙黄色,分子量452丽春红(红色,j女子量,480.42

酸性品红(红色,分子量,585.53苯胺蓝(蓝色,分子量737.72

亮绿(绿色,分子量792.72

甲基蓝(蓝色,分子量,799

因此,在VanGieson氏法中,苦味酸染红细胞和肌纤维,酸性品红染胶原纤维,而在Masson氏法中,酸性品红或丽春红染肌纤维,而苯胺蓝或亮绿染胶原纤维。染色

反应是一个很复杂的过程,胶原纤维染色除上述两个方面外,不排除电子吸附和排斥作用。在实际染色中,两种阴离子染料的比例也是很重要的。在VanGieson氏染色,苦味酸与酸性品红浓的比例若不恰当,如苦味酸的浓度太高,小分子量染料苦味酸占优势,则结构致密的胞浆,肌纤维和结构疏松的胶原纤维都会被苦味酸所着染。这点是要注意的。

应用:

胶原纤维和肌纤维的鉴别染色是病