朱鹮金黄色葡萄球菌、单核细胞增多性李斯特菌和沙门氏菌多重PCR检测技术规程.pdfVIP

朱鹮金黄色葡萄球菌、单核细胞增多性李斯特菌和沙门氏菌多

重PCR检测技术规程

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1范围

本标准规定了朱鹮金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、单核细胞增多性李斯特菌（Listeria

monocytogenes）和沙门氏菌（Salmonella）的PCR检测方法。

本标准适用于朱鹮等野生动物、畜禽等养殖动物病料样本以及鱼、肉等食物中金黄色葡萄球菌、单

核细胞增多性李斯特菌和沙门氏菌的PCR检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本标准必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本标准；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

标准。

GB4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验

GB4789.30食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验

GB19489实验室生物安全通用要求

SN/T2123出入境动物检疫实验样品采集、运输和保存规范

SN/T2025动物检疫实验室生物安全操作规范

SN/T2984检验检疫动物病原微生物实验活动生物安全要求细则

3术语、定义和缩略语

下列术语、定义和缩略语适用于本文件。

术语和定义

3.1.1

金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus

为革兰氏阳性细菌，球形，呈葡萄状排列，无芽孢，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。

3.1.2

单核细胞增多性李斯特菌Listeriamonocytogenes

为革兰氏阳性杆状细菌，多数菌体一端较大，似棒状，常呈V字型排列，有的呈丝状，偶尔可见双

球状，β-溶血，通常具有半胱氨酸酶活性。

3.1.3

沙门氏菌Salmonella

为革兰氏阴性杆状菌，无芽孢，一般无荚膜，能发酵葡萄糖、甘露醇，大多产酸产气。

缩略语

1

下列缩略语应用于本文件。

PCR:聚合酶链式反应（polymerasechainreaction）

DNA:脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid）

dNTP:脱氧核苷酸三磷酸（Deoxyribonucleosidetriphosphate）

4试剂及材料

PCR仪。

可调移液器：2.5μL、10μL、100μL、1000μL。

恒温培养箱：37℃。

电泳仪。

凝胶分析成像系统。

无菌试管：18mm×180mm。

超净台。

冷冻离心机。

BPW培养基（缓冲蛋白胨水培养基）（详见A.1。）。

+

G细菌基因组DNA纯化试剂盒或其他有效试剂。

核酸裂解液;2%CTAB,100mmol/LTris-HCl(pH8.3),1.4mol/L氯化钠,20mol/LEDTA(pH

8.0)。

异丙醇。

70%乙醇:70%无水乙醇,30%灭菌蒸馏水(体积比)

灭菌蒸馏水，应符合GB/T6682—2008中一级水的规格

10×PCR缓冲液(见A.2)。

dNTP:10mmol/L,每种2.5mmol/L。

琼脂糖(电泳纯)。

DNA分子量标志物(50bp～500bp)

GelRed或GelGreen核酸染色剂。

6×上样缓冲液:30mmol/LEDTA、36%(体积分数)甘油、0.05%(质量浓度)二甲苯腈蓝FF、

0.05%(质量浓度)溴酚蓝。

50×TAE缓冲液(见A.3)

Eppendorf管和PCR反应管