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分光光度计待测管样品浓度公式

分光光度法是化学和生物学领域的宝贵工具。基本思想很简单：

不同的物质某些波长下比其他波长下更好地吸收光/电磁辐射。

例如，这就是为什么某些材料是透明的而另一些是彩色的。当您通过

溶液照射给定波长的光时，其浓度越高，它将吸收的光越多。要计算

浓度，您需要将读数与已知浓度标准品的读数进行比较。下面的过程

是考虑化学教学实验室编写的相当通用的过程，但也可以针对其他设

置进行修改。

与往常一样，实验室工作时，戴上护目镜，手套和长袖外套，

以确保自己的安全。

挤压橡皮灯泡以排空空气，然后将其放刻度移液管的顶部，让

灯泡放松，以便将水吸到移液管中。接下来，取出灯泡，并用手指盖

住移液器的顶部；这将密封移液器，以使内部的溶液手指移开之前

不会流出。轻轻提起手指的边缘，使少许溶液从移液管中流出，直到

达到所需的体积。用水和烧杯练习，以了解移液器的工作原理。参考

资料部分下的链接有一个影片剪辑，向您展示如何使用移液器，以防

您以前从未使用过移液器。

将5个试管标记为标准1-5。您可以使用美纹纸胶带和钢笔或干

擦标记器对它们进行标记。

选择五个浓度作为您的标准。您希望标准浓度彼此之间以大约相

同的间隔（例如0.1摩尔，0.2摩尔，0.3摩尔等）分开，并且与

未知浓度相同的范围内。目前，请使用以下五个浓度，但是请记住，

执行自己的实验时需要修改这些浓度：

标准品1：0.1摩尔标准品2：0.2摩尔标准品3：0.3摩尔标准

品4：0.4摩尔标准品5：0.5摩尔

接下来，取1摩尔标准溶液，并向试管1-5中添加以下量。请记

住，这些量是使用上面列出的浓度计算的，因此您执行自己的实验

时可能需要根据需要对其进行修改。

标准1：0.8毫升标准2：1.6毫升标准3：2.4毫升标准4：3.2

毫升标准5：4毫升

冲洗移液管，然后转移以下量的去离子水：

标准1：7.2毫升标准2：6.4毫升标准3：5.6毫升标准4：4.8

毫升标准5：4.0毫升

基本上，这个想法是使每个试管中的溶液量达到8毫升。

用石蜡膜盖住每个标准管，并颠倒混合。

将另外五个试管标记为“未知1-5”。向每种溶液中加入与1摩

尔标准溶液相同量的未知溶液或测试溶液。换句话说，未知数1将包

含0.8毫升的测试溶液和7.2毫升水，未知数2将包含1.6毫升的测

试溶液和6.4毫升水，依此类推。

用封口膜盖住每个未知物，并小心地倒转混合。

打开分光光度计并使其预热。所需的时间长度将取决于型号和制

造商。

分光光度计上设置波长。波长将取决于实验中化学物质的类型。

现，假设为500nm，尽管请记住您需要针对不同的实验进行更改。

校准分光光度计。校准步骤会因所使用的设备而异。对于教学实

验室中的常见型号Spectronic20，您将首先调整机器，使其未装

入比色杯时读数为“0％T”，然后将其调整为当包含去离子水的空白

比色杯时读数为“100％T”。只装水。这些步骤可能会因所用机器的

类型而异，因此请查阅制造商的说明以了解详细信息。

校准机器后，将标准的1试管倒入干净的比色杯中，直至达到填

充线。用Kimwipe擦拭比色杯，以除去任何指纹或其他污垢。将试管

插入分光光度计，并记录“％T”读数。

对所有10个样本重复此过程。一定要清洁样品之间的比色杯，

以确保您的结果尽可能准确。

根据您的标准获取结果，并将其输入到电子表格/制图程序中，

例如Excel或OpenOffice。

使用电子表格程序，将标准的每个“％T”值除以100％，然后

记录结果。该计算将为您提供吸光度。如果输入公式，则电子表格程

序将为您进行计算。

示例：如果％T为50.6，则您输入到电子表格程序中的公式将如

下所示：

日志（100/50.6）

电子表格程序将执行算术运算。

对所有五个未知/实验值进行相同的操作。

绘制所有五种标准液的吸光度值，其中x轴为浓度，y轴为吸光

度。使用电子表格程序，将线性方程拟合到该图。该方程的形式为

y=mx+b。大多数电子表格程序将具有线性回归函数。有关如何使用线

性回归功能的详细信息，请查阅电子表格程序的用户手册。

从电子表格程序中获取最适合直线的方程式，并通过从两侧减去