如何应对ELISA基质效应？研科生物.pdfVIP

如何应对ELISA基质效应？研科生物

这个坑，别栽了！如何应对ELISA基质效应？

2001年6月,美国曾爆出过一个大新闻：因为临床诊断中，hCG免疫检测试剂盒得到

了假阳性结果，使一位名叫JenniferRufer的女性被误诊为癌症，因此经历了长期化疗、

肺部手术、甚至子宫切除。当事人把医院和诊断试剂公司告上法庭，获得了1620万美元

的赔偿，创下当时医疗事故的最高赔偿金额。

胜诉后的JenniferRufer

痛苦的遭遇，巨额的赔偿，就因一个hCG检测假阳性结果而起，这太坑了！法院把

责任判给了诊断试剂公司和医院，但这事的始作俑者其实是一种被称为基质效应”的免

疫检测干扰现象。

基质效应

基质是指样品中目标分析物以外的部分，由于基质成分会对分析过程有显著干扰，影

响分析结果的准确性。业内把这些影响统称为基质效应（MatrixEffects）。这是免疫检

测方法开发和使用中需要避开的大坑。

JenniferRufer事件就是一个典型的基质效应造成假阳性的案例。该hCG试剂盒用的

抗体是鼠源的，业界观点认为部分人群血液含有抗鼠抗体（HAMA），它们对鼠源的捕获

抗体和检测抗体都有高亲和力，会造成基质效应，导致了假阳性。

如何评估基质效应

基质效应的原因错综复杂，但不用担心，有两种简单的方法可以用来评估基质效应。

1.线性稀释：

一般来讲，抗原和捕获/检测抗体之间的结合作用很强，样品浓度被稀释并不影响它

们的结合，而造成基质效应的非特异结合的力要弱很多，如果不断稀释样品，非特异结合

造成的干扰会逐步减少，测量值也更接近真实值。没有基质效应时，无论如何稀释，测量

值都和真实值吻合。而有基质效应时，稀释会造成非特异性结合比例的减少，测量值也相

应地生很大改变：

前文提到，基质效应导致的结果有假阴性和假阳性两种，在线性稀释时就可以辨别出

来。下图是两组实测的ELISA品线性稀释的对比结果，不同品牌的ELISA试剂盒表现差

距非常大：

图中的纵坐标代表的是回收率。定义用原液直接检测的值为100%，不同稀释比下的

测量值先乘上稀释比换算出浓度，再除以原液直接检测的值，比值的百分数，就是回收率。

左图的黄色线，和右图的红色线，曲线平直，回收率稳定在90-110%，很好地控制

了基质效应的干扰。左图的紫色线，回收率随线性稀释严重偏离100%，说明存在显著的

基质效应；而回收率升高的趋势，说明稀释前的真实浓度被压低，对应基质效应是假阴性。

右图的绿色线也严重偏离100%，但回收率随稀释降低，于左图紫色线正好相反，属于明

显的假阳性基质效应。

2.掺入/回收率实验（Spike/RecoveryAssay）

基质效应还可以通过分析物的掺入/回收率实验发现，将低、中和高浓度的分析物掺

入到已测定过浓度的样本中，掺入前后实测到的浓度增加部分与掺入浓度之比就是回收率，

回收率以百分比的形式呈现。回收率介于80-120%，才符合标准。

RDSystems让您免受基质效应折磨

基质效应可以通过品研发阶段的优化尽可能去消除的。在ELISA试剂盒领域，

RDSystems是行业金标准，品是高品质的代名词，其中一个质量控制指标就是针对

基质效应的品优化:

1.量身定制的缓冲液系统

优化缓冲液是消除基质效应的重要一环，RDSystems进行ELISA试剂盒研发时，

资深专家们会根据品类型进行系统的缓冲液优化，为每种分析物量身定制最佳的缓冲液

组合：

QuantikineELISAKit包含多种缓冲液，主要是AssayDiluent和CalibratorDiluent

两种稀释液，对于差异较大的样本，如细胞上清对比血清/血浆，会有专门的稀释液分别

对应。这些优化后的缓冲液体系能很好消除基质效应。

2.排除交叉反应

当检测某个分析物时，其他相关因子或类似结构因子如果有非特异性结合，也会导致

基质效应。为此，RDSystems在QuantikineELISAKit研发时会进行详尽的交叉