纯化水细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证方案及报告.docx

纯化水细菌、霉菌及酵母菌计数方法

验证方案及报告

文件编号：**VP*****-*文件类别：验证

***********公司

验证方案批准

方案起草

方案起草

签名

日期

质量治理部

方案审核

方案审核

签名

日期

QC负责人

QA负责人

质量治理部负责人

方案批准

方案批准

签名

日期

验证领导小组负责人

总经理

2

3

3

验证小组人员名单

组长

组长

姓名

职务/职称

部门

成员

姓名

职务/职称

部门

名目

1、引言 5

2、验证参与部门及责任 5

3、验证方法 5

文件要求 6

菌种 6

菌液制备 7

验证方法 7

验证结果 8

4、结果推断 10

5、验证结论及评价 11

6、验证报告批准书 12

引言

概述

微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查工程包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及掌握菌检查。当建立药品的微生物限度检查法时，应进展细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证和掌握菌检查方法的验证。

进展上述验证前，应首先对验证过程中使用的仪器、仪表及微生物限度检查的环境进展验证。

微生物限度检查应在环境干净度10000级下的局部干净度100级的单向流空气区域进展。检验全过程必需严格遵守无菌操作，防止再污染。

除另有规定外，细菌培育温度为30-35℃；霉菌、酵母菌培育温度为23-28℃；掌握菌培育温度为35-37℃。

验证目的

确认所承受的方法适合于纯化水的细菌数、霉菌数、酵母菌数的测定。

验证执行的文件

超净工作台标准操作规程微生物限度检查法

培育箱标准操作规程

热压灭菌锅标准操作规程

验证参与部门及责任

序号

部门

职责

1

质量治理部

起草验证方案、组织实施验证

2

设备工程部

仪器仪表校验

3

质量治理部

设备、仪器操作，菌数的测定及结果推断

验证方法：

文件要求所需文件

内容

仪器仪表校验合格证

质检中心万级空气净化系统验证报告超净工作台验证报告

编号 存放地点

6

培育箱验证报告

培育箱验证报告

热风循环枯燥箱验证报告热压灭菌锅验证报告

检查人： 日 期：

菌种

验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代〔从菌种保存中心获得的冷冻枯燥菌种为第0代〕，并承受适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。

菌种类别

大肠埃希菌[CMCC〔B〕44102]

金黄色葡萄球菌[CMCC〔B〕26003]

枯草芽孢杆菌[CMCC〔B〕63501]

白色念珠菌[CMCC〔F〕98001]

黑曲霉[CMCC〔F〕98003]

传代次数 菌种保藏现状

确认人： 日期：

菌液制备

分别取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的颖培育物少许，各接种至5ml养分肉汤培育基中，在36℃±℃培育18-24小时，取均匀培育物1ml用0.9%无菌氯化钠溶液按10倍递增稀释至1:107,制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。

接种白色念珠菌的颖培育物至改进马丁培育基中，培育24-48小时，取均匀培育物1ml用0.9%无菌氯化钠溶液按10倍递增稀释至1:107,制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。

接种黑曲霉的颖培育物至改进马丁琼脂斜面培育基中，培育5-7天，参加5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液1mL〔用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管〕至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液按10倍递增稀释至1:107,制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。

制备人： 日期：

验证方法

验证试验分四组，进展3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。

试验组取纯化水原液1ml和50~100cfu试验菌加至100mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，摇匀，过滤。滤膜菌面朝上贴于养分琼脂培育基或玫瑰红钠琼脂培育基平板上培育48小时或72小时，测定其菌数。

菌液组取上述试验菌液，方法同试验组，测定其参加的试验菌菌数。

供试品比照组取纯化水原液1ml，方法同试验组，按菌落计数方法测定其本底菌数。

稀释剂比照组为考察供试液制备过程对微生物的影响程度，用稀释液替代供试液，参加上述试验菌液，按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。

阴性比照取稀释液pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液100ml,过滤。方法同试验组，按菌落计数方法测定其菌数。阴性比照应无菌生长。

试验组菌的回收率=试验组平均菌落数?供试品比照组平均菌落数?100%

菌液组的平均菌落数

稀释剂比照组的菌回收率=稀释剂比照组的平均菌落数?100%

菌液组的平均菌落数

验证结果