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概讲细胞破碎技术

1.细胞破碎技术的概述

细胞破碎技术是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁，使细胞内容物包括目的产物成分释放

出来的技术，是分离纯化细胞内合成的非分泌型生化物质〔产品〕的基础。结合重组DNA

技术和组织培养技术上的重大进展，以前认为很难获得的蛋白质现在可以大规模生产。

3.细胞破碎技术的发展现状

目前已发展了多种细胞破碎方法，以便适应不同用途和不同类型的细胞壁破碎。破碎

方法可规纳为机械法和非机械法两大类。

目标产物的分离纯化在现代生物技术工业中占有十分重要的位置，它决定着产品的纯度

和安全性，也决定着产品的收率与成本。许多生物产物在细胞培养过程中不能分泌到胞外，

而保留在细胞内。破碎细胞的目的就是使细胞壁和细胞膜受到不同程度的破坏或破碎，释放

其中的目标产物。自20世纪80年代初重组DNA技术得到广泛应用以来,生物技术发生了质

的飞跃,生物产品的数量越来越多,许多具有重大应用价值的产品应运而生,如具有显著医疗

作用的胰岛素、干扰素、生长激素、白细胞介素一2等,它们的基因分别在宿主细胞(如大肠

杆菌或酵母细胞)内克隆表达成为基因工程产物,从而提高了产量,降低了成本。很多基因工

程产物都是胞内物质(如上述药物经克隆表达后都属胞内物质),分离提取这类产物时,必须

将细胞破壁,使产物得以释放,才能进一步提取。因此细胞破碎是提取胞内产物的关键性步骤,

破碎技术的研究更加引起基因工程专家和生化工程学者的关注。

2.常见的细胞破碎阻力

不同种类的细胞结构差别很大，破碎的难易程度也不同。

由难到易的大致排列顺序为：植物细胞＞真菌〔如酵母菌〕＞革兰氏阳性细菌＞革兰氏

阴性细菌＞动物细胞。

2.1.细菌细胞破碎阻力

几乎所有细菌的细胞壁都是由肽聚糖〔peptidoglycan〕组成，它是难溶性的聚糖链

〔glycanchain〕，借助短肽交联而成的网状结构，包围在细胞周围，使细胞具有一定的形

状和强度。短肽一般由四或五个氨基酸组成，如L-丙氨酰-D-谷氨酰-L-赖氨酰-D-丙氨酸。

而且短肽中常有D-氨基酸与二氨基庚二酸存在。破碎细菌的主要阻力是来自于肽聚糖的网

状结构，其网结构的致密程度和强度取决于聚糖链上所存在的肽键的数量和其交联的程度，

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如果交联程度大，则网结构就致密。

2.2.酵母菌细胞破碎阻力

酵母细胞壁的最里层是由葡聚糖的细纤维组成，它构成了细胞壁的刚性骨架，使细胞具

有一定的形状，覆盖在细纤维上面的是一层糖蛋白，最外层是甘露聚糖，由1,6一磷酸二酯

键共价连接，形成网状结构。在该层的内部，有甘露聚糖-酶的复合物，它可以共价连接到

网状结构上，也可以不连接。与细菌细胞壁一样，破碎酵母细胞壁的阻力主要决定于壁结构

交联的紧密程度和它的厚度。

2.3.真菌细胞破碎阻力

霉菌的细胞壁主要存在三种聚合物，葡聚糖〔主要以β-1,3糖苷键连接，某些以β-1,6

糖苷键连接〕，几丁质〔以微纤维状态存在〕以与糖蛋白。最外层是α-和β-葡聚糖的混合

物，第2层是糖蛋白的网状结构，葡聚糖与糖蛋白结合起来，第3层主要是蛋白质，最内层

主要是几丁质，几丁质的微纤维嵌入蛋白质结构中。与酵母和细菌的细胞壁一样，真菌细胞

壁的强度和聚合物的网状结构有关，不仅如此，它还含有几丁质或纤维素的纤维状结构，所

以强度有所提高。

2.4.植物细胞细胞破碎阻力

对于已生长结束的植物细胞壁可分为初生壁和次生壁两部分。初生壁是细胞生长期形

成的。次生壁是细胞停止生长后，在初生壁内部形成的结构。目前，较流行的初生细胞壁

结构是由Lampert等人提出的“经纬〞模型，依据这一模型，纤维素的微纤丝以平行于细胞

壁平面的方向一层一层敷着在上面，同一层次上的微纤丝平行排列，而不同层次上则排列方

向不同，互成一定角度，形成独立的网络，构成了细胞壁的“经〞，模型中的“纬〞是结构

蛋白〔富含羟脯氨酸的蛋白〕，它由细胞质分泌，垂直于细胞壁平面排列，并由异二酪氨酸

交联成结构蛋白网，径向的微纤丝网和纬向的结构蛋白网之间又相互交联，构成