品质管理质量控制6流式细胞术的质量控制和影响因素.pdfVIP

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吸标本取材时，要避免出血坏

死组织。

②标本采集后要及时固定或深低

温保存，以免组织发生自溶，

DNA降解，而造成测试结果的

误差。

③固定剂要采用对组织细胞穿透

性强的浓度。

​

胞表面快速形成一个蛋白膜，

致使细胞内的物质固定不良。

有作者分析研究了自溶对

DNA测定的影响，发现自溶

的组织细胞常出现假性异倍

体，且不固定的组织细胞随

时间的延长，DNA含量呈梯

度降低

​

使用醇类固定剂较好而不选

择醛类固定剂，醛类固定剂

明显影响细胞DNA荧光发射

强度。实验证明，醛类固定

剂对插入性荧光染料与核酸

的结合有很强的干扰作用，

其荧光强度仅相当于新鲜组

织荧光强度的50-70%左右。

​

温保存条件时，要根据所测物

质在细胞内还是在细胞膜表面，

在膜表面的抗原物质，以醛类

固定剂为宜，尽管醛类固定剂

产生的非特异性荧光较强，但

不宜采用醇类固定剂，因醇类

固定剂可使细胞表面的糖蛋白、

脂蛋白脱落丢失，失去标记的

位点。

​

如所测抗原物质在细胞内，

可以使用醇类固定剂，这种固

定方法简便易行，无需特殊低

温冷冻条件，在一般冰箱(0-

4℃)放置即可，能很好的保持

细胞形态和生物化学成分不发

生变性。

​

人体的末梢血液和骨髓细

胞及淋巴组织是人体组织中缺

乏细胞间连结装置的组织，尤

其是血和骨髓细胞是天然的单

分散细胞材料，其中的细胞成

分在生理状态下呈单分散状态，

它是流式分析最合适的样品来

源。

​

检测前须将所测的某群细胞

成分分离出来。例如，以淋

巴细胞DNA定量分析为例，

就须把淋巴细胞分离出来，

而将其他有核细胞或红细胞

去除，对于血小板的分析样

品制备过程中须防止过高离

心速度造成血小板膜的损伤，

出现血小板凝集

​

术和方法，仍存在着很多问

题，仍需大量的探索工作。

就目前，国内外对实体组织

分散单细胞还没有找到一个

适用的又通用方法，甚至同

样组织，用于不同的实验目

的，就需要不同的方法处理，

或者每一种组织就是一个单

独的问题

​

胞产量高，细胞损伤小的目

标，但实际工作中达到这个

目标是困难的，多年来对于

实体组织的分散解聚多采用

酶学法，化学法、机械物理

方法以及低渗脱核方法等，

根据各种组织的特点，以及

实验目的的不同，可选择不

同的方法。

​

①选则酶学方法时，应注意选

择酶类型的问题，含有大量

结缔组织的，选择胶原酶好，

不宜选择胃蛋白酶或胰酶。

并要注意酶的活性条件和影

响因素，要注意酶的溶剂，

消化时间，pH值，浓度等

对酶活性的影响

​

①酶学方法分散组织都有一定

的应用限制，特别用于流式

免疫荧光实验时，酶处理可

能改变或丢失膜的抗原成分，

从而影响分析结果，由于酶

学方法分散下来的细胞产量

低，用组织较多，还要注意

酶