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标准菌株使用标准操作规程

标准菌株使用标准操作规程

1检验目的

对实验室的标准菌株进行合理的保存，并规范合理的使用流程，保证菌株的性能稳定可靠。

2范围

微生物实验室保存的标准菌株。

3职责

微生物组工作人员正确执行本操作规程。

4术语和定义

4.1标准菌株

其特征进行了分类和描述，有明确的来源。ATCC（AmericanTypeCultureCollection）美国标准菌株收藏中心。

4.2标准储备菌株

标准菌株经过一代转接后获得的同种菌株。

4.3工作菌株

标准储备菌株传代后得到的同种菌株。

4.4标准培养物

标准菌株、标准储备菌株、工作菌株的统称。

4.5质控菌株

ATCC最佳，但当无法获得时可以使用ATCC演化的菌株或我国国家菌种库储存的标准菌株。特殊情况，例如定性试验可用已知的菌种作为质控菌株。室间质评的菌株即可。

5保存程序

5.1标准菌株

5.1.1商业购买的ATCC标准菌株干粉，-80℃低温保存，可以2年以上。安瓿真空包装的，-80℃可长期稳定保存。将标准菌株进行编号和登记。

5.1.2复苏

用1ml无菌的小牛血清或营养肉汤溶解。根据菌种的生长特点，接种到新鲜培养基上选择适宜的培养条件培养18-24h。酵母菌要求3天，形成孢子的微生物宜保存孢子。

5.2标准储备菌株

5.2.1由复苏后的ATCC标准菌株制备。复苏后的标准菌株要检查其纯度，必要时进行生化试验检查。刮取培养物上的菌体，用足量的菌悬浮于防冻培养基中。防冻液可以是无菌脱纤维羊血、10%甘油肉汤。储存足够量的标准储备菌株，可用1-2年。一年52周需要52支以上。

5.2.2甘油肉汤保存法

成分有蛋白胨、牛肉浸出粉、氯化钠、甘油、纯化木。相当于20%的甘油。挑取5环菌落加入到1ml甘油肉汤中

购买的标准菌株（可追溯来源，卫生部室间质评菌株可作为质控菌株使用，按照标准菌株管理）

购买的标准菌株（可追溯来源，卫生部室间质评菌株可作为质控菌株使用，按照标准菌株管理）

0代

接种传代培养一次，并进行纯度和生化鉴定

接种传代培养一次，并进行纯度和生化鉴定

1代

作为“储存标准菌株”进行多个分装保存，按照特定条件储存和推荐的储存时间

作为“储存标准菌株”进行多个分装保存，按照特定条件储存和推荐的储存时间

每天传代平板作为第二天的工作标准菌株，进行室内质控，用完立刻高压处理

每天传代平板作为第二天的工作标准菌株，进行室内质控，用完立刻高压处理

2代

进行纯度检查和生化鉴定。作为传代物或者第一支“工作菌株”特定的储存条件和推荐储存时间

进行纯度检查和生化鉴定。作为传代物或者第一支“工作菌株”特定的储存条件和推荐储存时间

可以再重复一周，规则同上。但一般来说工作菌株不能超过3

可以再重复一周，规则同上。但一般来说工作菌株不能超过3代

室内质控

7质量控制

7.1观察菌落的典型形态是否符合菌种。有没有杂菌生长。

7.2用氧化酶、触酶、上机等生化试验，鉴定菌种有没有变化。

7.3如果有污染或怀疑有问题时，应准备新的首次传代物或者获取新的标准菌株。

8参考文献

序号

唯一性编号

文献名称

9.1

ISBN978-7-117-19862-2/R·19863

《全国临床检验操作规程》第四版

9.2

ISBN978-7-5478-1226-6/R·395

《临床微生物学诊断与图解》第三版

9.3

GBT27405-2008

实验室质量控制规范食品微生物检测

9.4

SNT2632-2010

微生物菌种常规保藏技术规程

9.5

WST232-2002

商业微生物培养基质量检测规程