SNT 3731.1-2013 食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法 第1部分鹌鹑成分检测 PCR法.docxVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T3731.1—2013

食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法第1部分：鹤鹑成分检测PCR法

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2013-11-06发布2014-06-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局

发布

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SN/T3731.1—2013

前言

SN/T3731《食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法》共分为以下6个部分：

——第1部分：鹌鹑成分检测PCR法；——第2部分：鹅成分检测PCR法；

——第3部分：鸽子成分检测实时荧光PCR法；——第4部分：火鸡成分检测实时荧光PCR法；——第5部分：鸭成分检测PCR法；

——第6部分：鹧鸪成分检测实时荧光PCR法。本部分为SN/T3731的第1部分。

本部分按照GB/T1,1—2009给出的规则起草。

本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、深圳市检验检疫科学研究院、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。

本部分主要起草人：宗卉、陈颖、阮周曦、张利平、韩建勋、曹琛福、张彩虹、杨俊兴、卢体康、花群义。

SN/T3731.1—2013

食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法第1部分：鹌鹑成分检测PCR法

1范围

SN/T3731的本部分规定了食品及饲料中鹌鹑成分检测的PCR方法。本部分适用于食品及饲料中鹌鹑成分的定性检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

多聚酶链式反应polymerasechainreaction;PCR

一种体外扩增DNA的方法。PCR使用一种耐热的多聚酶，以及两条含有20个左右碱基的单链引物。经过高温变性将模板DNA分离成两条链，低温退火使得引物和一条模板单链结合，然后是中温延伸，反应液的游离核苷酸紧接着引物从5端到3端合成一条互补的新链。而新合成的DNA又可以继

续进行上述循环，因此DNA的数自不断倍增。3.2

TagDNA酶ThermusaquaticusDNApolymerase

从Thermusaquaticus细菌中提取的耐热DNA聚合酶。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

dNTP:脱氧核糖核苷三磷酸(deoxy-ribonucleosidetriphosphate)CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrithylammoniumbromide)Tris:三(羟甲基)氨基甲烷(tris(hydroxymethyl)aminomethane)

EDTA:乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid)DNAMarker:核酸相对分子质量标准

5方法提要

样品经研磨混匀后，提取DNA,以DNA为模板，采用鹌鹑线粒体12sRNA基因特异性检测引物

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SN/T3731.1—2013

进行PCR扩增，经电泳，在245bp大小处观察是否有扩增条带，必要时进行测序，来判断样品中是否存在鹤鹑成分。

6试剂和材料

除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。

6.1检测用引物(对)序列

鹤鹑成分扩增引物详见表1。

表1试验用引物

名称

序列(5-3*)

目的基因

钨鹑成分5’端引物钨鹑成分3’端引物

F:5-TGAGCTCAATAGCCGCCA-3’R:5-TGGCTTAATGGTTGGGTG-3

鹌鹑线粒体12sRNA基因

6.2试剂

6.2.1裂解液：1%CTAB;0.05mol/LTris-HCl(pH8.0);0.7mol/LNaCl;0.01mol/LEDTA(pH8.0)。

6.2.2DNA聚合酶。

6.2.310×PCR