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分⼦⽣物学实验复习题附答案（最新整理）

分⼦⽣物学复习题

实验⼀DNA的制备

（1）为什么分⼦⽣物学实施时要担⼼EB？

溴化⼄锭（Ethidiumbromide）是DNA诱变剂，溴化⼄锭可以嵌⼊碱基分⼦中，导致错配。具有⾼致癌性(接触致癌)

（2）DNA加样缓冲液的⽤途是什么？

由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产⽣不利的影响，在抽提缓冲液中需加⼊抗氧化剂或强还原剂

(如巯基⼄醇)以降低这些酶类的活性。

线状DNA⼤⼩/kb60-520-110-0.87-0.56-0.44-0.23-0.1

（4）琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理是什么

DNA分⼦在pH值⾼于其等电点的溶液中带负电荷，在电场中向阳极移动。DNA分⼦在电场中通过琼脂糖凝胶⽽泳动，除了电

荷效应以外，还有分⼦筛效应。由于DNA分⼦可⽚段的相对分⼦质量不同，移动速度也不同，所以可将相对分⼦质量不同或

构象不同的DNA分离。DNA⽚段迁移距离（迁移率）与碱基对的对数成反⽐，因此通过已知⼤⼩的标准物移动的距离与未知

⽚段的移动距离时⾏⽐较，便可测出未知⽚段的⼤⼩。但是当DNA分⼦⼤⼩超过20kb时，普通琼脂糖凝胶就很难将它们分

开。此时电泳的迁移率不再依赖于分⼦⼤⼩，因此，就⽤琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，分⼦⼤⼩不宜超过此值。

（5）琼脂糖凝胶电泳时胶中DNA是靠什么发出荧光的？为什么？

溴化⼄锭是⼀种⾼度灵敏的荧光染⾊剂,可插⼊DNA双螺旋结构的两个碱基之间，形成⼀种荧光络合物。在254nm波长紫外光

照射下，呈现橙黄⾊的荧光。⽤溴化⼄啶检测DNA，可检出10-9g以上的DNA含量。

（6）制备基因组DNA时⽤到的以下试剂分别起什么作⽤？

CTAB等离⼦型表⾯活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋⽩，使核蛋⽩解聚，从⽽使DNA得以游离出来

氯仿有机溶剂，能使蛋⽩质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)⽔溶性很强，经离⼼后即可从抽提液中除去细胞碎⽚

和⼤部分蛋⽩质。

⽆⽔⼄醇上清液中加⼊⽆⽔⼄醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE溶液中，即得植物总DNA溶液。75%⼄醇,⼄醇轻轻洗涤管壁

实验⼆RNA的制备

1.制备RNA时通常要注意些什么？为什么？

应该要注意(1)不要徒⼿操作,必须带⼿套;(2)加样时不能够⼤声说话,防⽌唾液等进⼊;

由于RNA分⼦的结构特点，容易受RNA酶的攻击反应⽽降解，加上RNA酶极为稳定且⼴泛存在，因⽽在提取过程中要严格防

⽌RNA酶的污染，并设法抑制其活性，这是本实验成败的关键。

2.制备的RNA通常有哪些⽤途？制备的DNA通常⼜有哪些⽤途？

研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。

质粒DNA构建克隆载体,分离⽬的基因

3.RNA制备好后是通过什么⽅法检测其有没有降解的？从胶上检测什么指标来判断RNA质量好坏？为什么？

1.2%琼脂糖凝胶电泳。在紫外检测仪下观察，完整的总RNA样品应呈现三条带：28S、18S、和5SrRNA。其中28SrRNA条

带的亮度应该为18SrRNA条带的1.5~2倍。反之，说明部分28SrRNA已经降解成18SrRNA。若⽆清晰条带，则说明样品

RNA已严重降解。若加样孔内或孔附近有荧光区带，则说明有DNA污染。

4.RNA制备好后通过什么⽅法测定其含量？

RNA通常⽤分光光度计测量，通常在A260的读书在0.15-1.0之间才是可靠的，A260为1相当于RNA的浓度为40微克/ml

实验三质粒DNA的制备

1.什么是质粒？质粒有什么主要⽤途？

染⾊体外⼩型（1-200kb）的共价、闭合、环状的双链DNA分⼦（cccDNA），能⾃主复制并能稳定遗传的遗传因⼦。常常编

码⼀些对宿主有利的酶的基因，这些基因的表型包括抗⽣素抗性、产⽣抗⽣素、限制酶、修饰酶等

⽤途:把⼀个有⽤的⽬的DNA⽚段通过重组DNA技术，送进受体细胞中去进⾏繁殖和表达的⼯具叫载体(Vector)。细菌质粒是

重组DNA技术中常⽤的载体。

2.分⼦⽣物学实验中⽤的质粒是由野⽣型改建⽽来的，它必须具备哪三个基本要素？

1环状DNA分⼦能够⾃我复制，或整合到染⾊体上，随染⾊体复制。

2有多个限制酶切点(便于切割)

3有标记基因(便于进⾏检验)

3.制备的质粒DNA在琼脂糖凝胶上通常以三种形式条带存在，它们分别是什么？哪种条带形式的质粒DNA其转化或转染效率

最⾼？

三种结构：线形、开环、闭环超螺旋。

实验四感受态细菌的制备及质粒DNA的