SN∕T 3731.4-2017 食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法 第4部分：火鸡成分检测实时荧光PCR法.docxVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T3731.4—2017

代替SN/T3731.4—2013

食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法

第4部分：火鸡成分检测

实时荧光PCR法

Identificationofpoultryingredientinfoodandfeed—

Part4:Detectionofturkeyingredient—Real-timePCRmethod

2017-07-21发布2018-03-01实施

中

中华人民共和国

发布

I

SN/T3731.4—2017

前言

SN/T3731《食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法》共分为以下6个部分：

——第1部分：鹤鹑成分检测PCR法；——第2部分：鹅成分检测PCR法；

——第3部分：鸽子成分检测实时荧光PCR法；———第4部分：火鸡成分检测实时荧光PCR法； 第5部分：鸭成分检测PCR法：

——第6部分：鹧鸪成分检测实时荧光PCR法。本部分为SN/T3731的第4部分。

本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本部分与SN/T3731.4—2013相比，主要技术变化如下：——检测用引物和探针序列。

本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国上海出入境检验检疫局。本部分主要起草人：张舒亚、吕蓉、谌鸿超、韩建勋、刘月明、褚庆华、陈颖、吴亚君。

本部分所代替标准的历次版本发布情况为：—-SN/T3731.4—2013。

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SN/T3731.4—2017

食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法

第4部分：火鸡成分检测

实时荧光PCR法

1范围

SN/T3731的本部分规定了食品和饲料中火鸡成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于食品和饲料中火鸡成分的定性检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

火鸡turkey

属雉科(Phasianidae)火鸡属(Meleagris),学名Meleagrisgallopavo。

3.2

实时荧光PCRrealtimePCR

在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程。3.3

Ct值cyclethreshold

每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

PCR:聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction)DNA:脱氧核糖核酸(DeoxyribonuleicAcid)

dNTP:脱氧核苷酸三磷酸(DeoxyribonucleosideTriphosphate)

CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(CetyltrithylammoniumBromide)Tris:三(羟甲基)氨基甲烷[Tris(Hydroxymethyl)Aminomethane]EDTA:乙二胺四乙酸(EthyleneDiaminetetraaceticAcid)

Taq:水生栖热菌(Thermusaquaticus)

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SN/T3731.4—2017

OD:光密度值(OpticalDensity)

5方法提要

样品经研磨后，提取DNA,以DNA为模板，采用火鸡的12SrRNA基因特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的增幅现象，判断样品中是否存在火鸡成分。

6试剂和材料

6.1检测用引物和探针

检测用引物和探针见表1。

名称

序列(5-3)

目的基因

火鸡成分5端引物火鸡成分3端引物火鸡成分探针

GCCCTAACCCCTTAAGAAAAGAAT

AGTTGCTATGGCTAAGTCAAGTTTACACAM-CTTGCTTGAGCCACACC-MGB

火鸡12SrRNA基因

6.2试剂

除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均

用无DNA酶污染的容器分装。