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备课素材：大肠杆菌发酵表达及代谢调控生物人教版选择性必修三--第1页
大肠杆菌发酵表达及代谢调控
2019版高中生物学选择性必修三说，大肠杆菌广泛应用于基因
工程的受体细胞：
之后，再用大肠杆菌发酵获取产品。
大肠杆菌及其衍生菌株是目前蛋白表达使用最广泛的菌株。与其
他革兰阴性菌一样，大肠杆菌有细胞内膜与细胞外膜之分，并将细胞
分成两部分空间，即细胞质与细胞周质，通常大肠杆菌表达的重组蛋
白存在于细胞质。细胞质内可溶性重组蛋白易受大肠杆菌内源性蛋白
酶降解，导致表达水平低下。形成包涵体的重组蛋白可有效避免内源
性蛋白酶的降解，且分离纯化方便，分离效率高，但重组蛋白的复性
较困难。
备课素材：大肠杆菌发酵表达及代谢调控生物人教版选择性必修三--第1页
备课素材：大肠杆菌发酵表达及代谢调控生物人教版选择性必修三--第2页
大肠杆菌的工业化发酵主要采用营养源诱导、温度诱导、IPTG
(丙基硫代半乳糖苷和乳糖诱导3种方式：
1.营养源诱导
营养源诱导启动子包括phoA、ugp、mgl及araB等，此种表达方
式受培养基中的营养物质无机磷浓度(Pi)、糖原或生物素调控，其
他尚有pH及溶氧诱导调控型，虽然其中一些表达系统的应用例子还
不多,但已显示出很好的发展潜力。
2.温敏性启动子诱导
温敏性启动子有PL、PR或其杂合启动子PLPR等。发酵培养温
度采用温度传感器检测并闭环控制，对于采用温敏型启动子的大肠杆
菌重组菌，温度检测与控制十分关键。在发酵过程中温度陡然升高，
使细胞内的酶活性加强，代谢加快，但当温度持续较高时，会引起细
胞内一些酶活性降低或变性，细胞活力逐渐减弱，甚至死亡，即产生
细胞内结构性变化。因此采用温敏型启动子菌株表达外源蛋白，诱导
时间较短，适用于培养规模较小的重组蛋白发酵。温度控制策略通常
以30℃或37℃开始培养大肠杆菌到所需的细胞密度，再升温至42℃
进行诱导培养。对于温敏型表达系统，最佳的发酵过程控制方法是在
42℃高温诱导培养1h后，采用温度逐渐下降的变温策略，诱导时间
可明显延长，表达水平明显提高。
3.IPTG及乳糖诱导
采用IPTG诱导发酵的重组菌，IPTG浓度应控制在亚适量水平，
备课素材：大肠杆菌发酵表达及代谢调控生物人教版选择性必修三--第2页
备课素材：大肠杆菌发酵表达及代谢调控生物人教版选择性必修三--第3页
浓度过高导致细胞中毒，浓度过低引起启动子启动程度减弱，从而影
响外源蛋白高效表达。另外IPTG存在于发酵液中时，对蛋白纯化亦
带来一定难度。由于IPTG对细胞有一定的毒害作用、大规模发酵价
格昂贵和蛋白质药物纯化操作难度增加等原因，在实际大规模发酵
时，一般均采用乳糖替代IPTG。乳糖与其他碳源比例是关键因素，
乳糖浓度过小，由于甘油等碳源对启动子产生阻遏作用或抑制作用，
使启动子不能启动或启动强度不够易造成不表达或低水平表达，而乳
糖浓度过大，会使得菌体只利用乳糖，造成碳源浪费，一般乳糖浓度
约为2g/L。
大肠杆菌培养过程中，特别是菌和宿主菌的生长速率、底物消耗
速率、产物生成速率、质粒稳定性等动力学规律，是大肠杆菌发酵过
程优化的重要基础。通过分批培养、补料分批培养和连续培养进行有
关动力学研究，对制定的优化控制策略加以验证和调整改进大肠杆菌
的代谢活动，可利用一
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