DB54T-青稞中燕麦镰刀菌LAMP检测技术规范.docxVIP

Q/LB.□XXXXX-XXXX

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ICS

FORMTEXT65.150

CCS

FORMTEXTB50

FORMTEXT54

FORMTEXT西藏自治区地方标准

DBFORMTEXT54/TFORMTEXTXXXX—FORMTEXTXXXX

FORMTEXT

FORMTEXT青稞中燕麦镰刀菌LAMP检测技术规范

FORMTEXT点击此处添加标准名称的英文译名

FORMDROPDOWN

FORMTEXT

FORMDROPDOWN

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX发布

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX实施

FORMTEXT西藏自治区市场监督管理局??发布

STYLEREF标准文件_文件编号DBXX/TXXXX—XXXX

STYLEREF标准文件_文件编号DB54/TXXXX—XXXX

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目次

TOC\o1-1\h\t标准文件_一级条标题,2,标准文件_附录一级条标题,2,前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4方法原理 1

5试剂和材料 1

6仪器和设备 2

7测定步骤 2

8结果判定 3

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由西藏自治区农业农村标准化技术委员会提出并归口。

本文件起草单位：

本文件主要起草人：

青稞中燕麦镰刀菌LAMP检测技术规范

范围

本文件规定了青稞中燕麦镰刀菌LAMP检测方法的方法原理、试剂和材料、仪器和设备、测定步骤和结果判定。

本文件适用于青稞中燕麦镰刀菌的检测。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

GB27403实验室质量控制规范视频分子生物学检测

术语和定义

请选择适当的引导语

环介导等温扩增技术Loop-mediatedisothermalamplification，LAMP

在等温（60℃~65℃）条件下，利用链置换DNA聚合酶，60min内实现脱氧核糖核酸扩增的技术。

方法原理

扩增原理

根据燕麦镰刀菌的翻译延伸因子序列中特异性序列设计特异性内、外引物一组，引物特异性性识别目标序列上的六个独立区域，利用BstDNA聚合酶启动循环链置换反应，在同一链上互补序列周而复始形成很多环的花椰菜结构的茎-环DNA混合物，加入显色液即可通过颜色变化观察判定结果。

SYBRGreenI染料显色原理

SYBRGreenI是一种高灵敏度的DNA荧光染料，可以嵌入方式结合到双链DNA双螺旋小沟区域内。当它与双链DNA结合时，荧光信号是游离状态的800～1000倍。在不发生扩增反应时，SYBRGreenI荧光信号很弱，颜色显现为橙色；当发生扩增反应时，随着双链DNA的增加，SYBRGreenI的荧光信号也随之大幅度增强，其信号强度与双链DNA分子的数量相关，同时颜色由橙色变为绿色。

试剂和材料

除有特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯，试验用水应符合GB/T6682中一级水的要求。

引物：根据燕麦镰刀菌DNA的翻译延伸因子序列基因设计一套特异性引物，包括外引物1、外引物2和内引物1、内引物2。

外引物（F3，5’~3’）1：GTGATACCACGCTCACGC

外引物（B3，5’~3’）2：GGTATCTTACCCCGCCACT

内引物（FIP，5’~3’）1：AATAGGAAGCCGCCGAGCTCTGAGCTTGTCAAGAACCCAG

内引物（BIP，5’~3’）2：TGGCTGCAAGACATAGTGCGCGATGCGCTTGCCCTGTTC

等温扩增PCR混合液（2×LAMPPCRMasterMix)本产品购置于生工生物（上海）股份有限公司。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。)）:包含0mmol/LTris~HCl、20mmol/L(NH4)2SO4、20mmol/LKCl（pH8.8）、16mmol/LMgSO4、2.0mm