酶工程微生物发酵产酶课件课件.ppt

2、控制阻遏物浓度微生物酶的生产受到代谢末端产物的阻遏和分解代谢物阻遏的调节。为避免分解代谢物的阻遏作用，可采用难于利用的碳源，或采用分次添加碳源的方法使培养基中的碳源保持在不致于引起分解代谢物阻遏的浓度。第31页,共41页，星期六，2024年，5月3、添加表面活性剂在发酵生产中，非离子型的表面活性剂常被用作产酶促进剂，但它的作用机理尚未搞清；可能是由于它的作用改变了细胞的通透性，使更多的酶从细胞内透过细胞膜泄漏出来，从而打破了胞内酶合成的反馈平衡，提高了酶的产量。此外，有些表面活性剂对酶分子有一定的稳定作用，可以提高酶的活力，例如在霉菌的发酵生产中添加1%的吐温可使纤维素酶的产量提高几倍到几十倍。第32页,共41页，星期六，2024年，5月4、添加产酶促进剂产酶促进剂是指那些能提高酶产量但作用机理尚未阐明的物质，它可能是酶的激活剂或稳定剂，也可能是产酶微生物的生长因子，或有害金属的螫合剂，例如添加植酸钙可使多种霉菌的蛋白酶和橘青霉的5’-磷酸二酯酶的产量提高2—20倍。第33页,共41页，星期六，2024年，5月第四节酶生物合成模式第34页,共41页，星期六，2024年，5月第35页,共41页，星期六，2024年，5月第36页,共41页，星期六，2024年，5月1、同步合成型：（1）酶的合成与细胞生长同步进行。当细胞进入对数生长期，酶大量产生，细胞生长进入平衡期后，酶的合成随着停止。（2）同步合成型又称生长偶联型。其生物合成可以诱导，但不受分解代谢物阻遏和反应产物阻遏。（3）当除去诱导物或细胞进入平衡期后，酶的合成立即停止，这表明这类酶所对应的mRNA是很不稳定的。第37页,共41页，星期六，2024年，5月2、延续合成型：（1）酶的合成伴随着细胞的生长开始，但在细胞生长进入平衡期后，酶还可以延续合成较长的一段时间。（2）属于延续合成型的酶可受诱导但不受分解代谢物阻遏和产物阻遏，而且该酶所对应的mRNA是相当稳定的，在生长平衡期以后相当长所一段时间内继续用于酶的合成。第38页,共41页，星期六，2024年，5月3、中期合成型：（1）酶的合成在细胞生长一段时间以后才开始，而在细胞进入平衡期后，酶的合成也随着停止。（2）特点是：其合成受到反馈阻遏，而且其所对应的mRNA是不稳定的。第39页,共41页，星期六，2024年，5月4、滞后合成型：（1）只有当细胞生长进入平衡期以后，酶才开始合成并大量积累。（2）属于滞后合成型的酶，在对数生长期不合成，可能是由于受到分解代谢物阻遏作用的影响，当阻遏解除以后，酶才开始大量合成。加上其所对应的mRNA稳定性高，所以能在细胞停止生长后，进继续利用积累的mRNA进行翻译而合成酶。第40页,共41页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第41页,共41页，星期六，2024年，5月**酶制剂制备的一般流程是破碎细胞、溶剂抽提、离心、过滤、浓缩、干燥。对于分析和医药用酶，还须进一步进行纯化。**随着酶制剂应用的日益广泛，为了扩大酶源，人们正越来越多地求助于微生物。(1)单位干重产物的酶比活很高。如细菌在合适条件下只须20~30min便可繁殖一代，而农作物至少要几天或几周才能增重一倍(2)所用原料大多为农副产品，来源丰富，价格低廉，机械化程度高，经济效益高。如同样生产1kg结晶的蛋白酶，如从牛胰脏中提取需要1万头牛的胰脏，而由微生物生产仅需数百千克的淀粉、麸皮和黄豆粉等副产品，几天便可生产出来(3)不同环境中的微生物有迥然不同的代谢类型，分解不同的基质有着多样性的酶，可以说一切动植物细胞中存在的酶几乎都能从微生物细胞中找到。(4)可以通过适应、诱导、诱变及基因工程等方法培育出新的产酶量高的菌种**微生物发酵产酶的方法和其他发酵行业类似，**（自然界是生产菌种的主要来源。但是，直接分离得到的菌种往往不能立即用于生产，还需经过一系列的遗传育种步骤。）**然而，不管哪种方法都必须有微生物作材料，而微生物来源于自然界，因此，分离筛选是一切工作的基础。1、含菌样品的采集虽然筛选产酶菌种至今尚无捷径可走，但若纵观前人研究的结果，也还有不少经验可供借鉴的。微生物分布的一定规律对于人们采集含产酶菌的样品大有启示：要获得产生某酶的菌种可从富含该酶作用底物的场所去采集含菌样品。例如蛋白酶生产菌最好到堆放鱼、肉、虾等蛋白质的地方采样或者从肉食动物（虎、豹等）的粪便中采样；到堆积腐烂纤维素的地方去取样，分离产纤维素酶的菌。淀粉酶产生菌常附着在谷物的表面，果胶酶则常常是由产纤维素酶的霉菌来生产。有些产酶菌生长条件近于