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酵母样真菌ROSCO法药敏试验标准操作程序--第1页
酵母样真菌ROSCO法药敏试验标准操作程序
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正确进行酵母样真菌ROSCO法药敏试验操作，监测耐药性酵母菌的出现及
其耐药性变化，为酵母样真菌治疗提供参考依据。
2
将含有定量抗真菌药物的药片贴在已接种待测菌的琼脂平板，药片所含药物
吸收琼脂上水溶解后向周围区域扩散，形成递减的梯度浓度，待测菌生长被抑
制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映了待测菌对测定药物的敏感性，根
据厂家提供的药敏试验判读标准，判断抗真菌药物的体外敏感性。
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3.1培养基：采用FMH琼脂，同时添加氯霉素控制细菌的污染。厚度严格控制
为4cm。
3.2接种液的配置：
3.2.1接种液的配制中，浓度的控制是最为重要的，接种液过浓会导致比咯类/咪唑
类抑菌圈判读困难，而出现假阴性结果。
5
3.2.2对于大多数的菌株，接种浓度为5*10CFU/ml(先配0.5麦氏浊度，再用生理
盐水1：1稀释)；
3.2.2.1对于克柔氏念珠菌(C.krusei)，先配0.5麦氏浊度，再用生理盐水1：10
稀释；
3.2.2.2对于隐球菌属(Cryptococcus)，先配1.0麦氏浊度，无需稀释。
3.2.3接种前，平板先置于35℃干燥20-25分钟。对于9cm平皿吸0.5ml接种液
，14cm吸1.0ml接种液，倾注于平板表面，涂布均匀，用移液管吸走多余液体。
然后，平板在35℃干燥10分钟，帖药片。最终要求，在琼脂表面，菌落恰呈合
生长。
3.3培养条件：在多数情况下，应在35℃培养18-24小时后马上测量抑菌圈，
因为培养时间过长会导致假耐药，特别是对于咪唑/吡咯类药物。即培养过夜后应
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检查平板，如果抑菌圈清晰，应该马上测量。如果对于某些菌株在培养过夜未见生
长，那么应该再多培养24小时。而对于隐球菌属在30℃培养42-48小时。
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严重系统性感染株判读标准
抑菌圈直径(mm)Breakpoints，MICug/ml
药物名称敏感中介耐药敏感耐药
两性霉素B/10ug≥1514-10＜10≤1≥4
氟康唑/25ug≥22≤14≤8≥64
21-15
氟胞嘧啶/1ug≥20≤11≤4≥32
19-12
氟胞嘧啶/10ug
≥30≤22≤4≥32
19-23
伊曲康唑/8ug
≥16≤9≤0.12≥1
15-10
酮康唑/1ug
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