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CCK-8操作说明与检测步骤

DOJINDO操作说明

细胞活性检测

1.在96孔板中接种细胞悬液(100ml/孔)。

将培养板放在培养箱预培养(在37℃，5%CO2

的条件下)。

2.向每孔加入10ml的CCK-8溶液(注意

不要在孔中生成气泡，它们会影响O.D值的读

数)。

3.将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

4.用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

5.如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的

话，可以向每孔中加入10ml0.1MHCl溶液

或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存

在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生

变化。

细胞增殖-毒性检测

1.在96孔板中配制100ml的细胞悬液。

将培养板在培养箱预培养24小时(在

37℃，5%CO2的条件下)。

2.向培养板加入10ml不同浓度的待测物质。

2.按比例(例如：1/2比例)依次用培

养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要

做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。

3.接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后

加CCK-8试剂培养一定时间后测定O.D值，

制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴)，O.D

值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准

曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此

标准曲线的前提条件是实验的条件要一致，便于

确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养

时间)。

DOJINDO检测步骤

CCK-8检测步骤

1.向各孔中加入100μl细胞悬液。a)

2.在37℃下预孵育培养板。b)

3.向各孔中加入各浓度的待测溶液c)10μl。

4.37℃下孵育。

5.向各孔中加入10μl的CCK-8溶液d)。

6.37℃下孵育1-4小时。e)

7.测定450nm处的OD值。

a)使用适当的培养基制备50,000-100,000个/ml的细胞悬液。

b)建议使用CO2培养箱过夜预培养。

c)使用培养基或PBS来制备溶液。

d)如果待测溶液有还原性，测定不含细胞，但含有CCK-8的待测溶液在450nm

处的空白吸光度。如果该吸光度很小，则可以直接加入CCK-8，如果吸光度相

对较大，则需要除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的100μl

培养基和10μlCCK-8进行检测。

e)白细胞可能需要培养较长时间。

活力计算

细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0加药）-A（空白）]×100

A（加药）：具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度

A（空白）：具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度

A（0加药）：具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力

问答：

1.一个孔中应接种多少个细胞？

当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量

至少为1,000个/孔(100μl培养基)