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植物钙调素（CaM）酶联免疫分析试剂盒实验原理

植物钙调素(CaM)酶联免疫分析试剂盒实验原理本试剂盒应用双抗体夹心

法测定标本中植物钙调素(CaM)水平。用纯化的植物钙调素(CaM)抗体包被微

孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入钙调素(CaM)，再与HRP

标记的钙调素(CaM)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤

后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下

转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物钙调素(CaM)呈正相关。用酶

标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物钙

调素(CaM)浓度。标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进

行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，

但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物

酶的（HRP）活性。操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一

支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。2.加样：分别设空白孔（空白

对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在

酶标包被板上标准品准确加样50micro;l，待测样品孔中先加样品稀释液

40micro;l，然后再加待测样品10micro;l（样品zui终稀释度为5倍）。加样

将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。10.终止：每孔加

终止液50micro;l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调

零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分

钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐

标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓

度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归

方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即

为样品的实际浓度。植物钙调素(CaM)酶联免疫分析试剂盒注意事项1．试剂盒

从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如

未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时

可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并

经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间zui好控制在5分钟内，

如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，zui好

做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD

值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以

总稀释倍数（乘以n乘以5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶

标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试

剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。植物

钙调素(CaM)酶联免疫分析试剂盒保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8

℃。2．有效期：6个月

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