DB34T 1940-2013 鸡传染性喉气管炎PCR检测技术规程　.pdfVIP

ICS11.220

B41

DB34

安徽省地方标准

DB34/T1940—2013

鸡传染性喉气管炎PCR检测技术规程

TechnicalregulationfordetectionofChickenInfectiousLaryngotracheitisbyPCR

2013-08-28发布2013-09-28实施

安徽省质量技术监督局发布

DB34/T1940—2013

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由安徽省农业委员会提出。

本标准起草单位：安徽农业大学动物科技学院、安徽省动物疫病预防与控制中心。

本标准主要起草人:王桂军、朱良强、耿照玉、占松鹤、汪彤、江定丰、魏建忠、潘玲、陈静、何

长生、杨德康、栗新、吴保谊。

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DB34/T1940—2013

鸡传染性喉气管炎PCR检测技术规程

1范围

本标准规定了应用聚合酶链反应（PCR）方法检测鸡传染性喉气管炎，包括样品的采集、样品处理、

试验材料、操作程序和结果判定等。

本标准适用于临床鸡传染性喉气管炎的检测和诊断。

2试验材料

2.1特异性引物

根据ILTV的TK基因序列设计了一对引物，序列为：上游引物A1：5-GGGAAACTTGAATGTCGG

GAG-3,下游引物A2：5-TGGATTATACGCCGTGCCTGT-3，扩增DNA片段大小为329bp，引

物的使用浓度为50mmol/L。

2.2试剂

2.2.1DNA提取试剂

DNA提取试剂如下：

——消化缓冲液：

10mmol/LTris-Cl，pH8.0；

0.1mmol/LEDTA，pH8.0；

10％SDS；

——20mg/Ml蛋白酶K；

——苯酚；

——氯仿；

——无水乙醇；

——75％乙醇；

2.2.2PCR试剂

PCR试剂如下：

——2×TaqPCRMsaterMix试剂；

——特异性引物；

——阳性对照：ILT活疫苗（含鸡传染性喉气管炎K317株病毒）

2.2.3电泳试剂

电泳试剂如下：

——溴化乙锭；

——琼脂糖：电泳级；

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DB34/T1940—2013

——电泳缓冲液

2.2.4其他试剂

其他试剂如下：

——灭菌双蒸水；

——1mol/L（灭菌）PBS：pH7.2。

2.3仪器设备及耗材

2.3.1仪器设备

本方法使用下列仪器设备：

——PCR仪；

——电泳仪；

——电泳槽；

——紫外光透射仪；

——凝胶成像系统；

——小型高速离心机；

——水浴锅；

——旋涡振荡器；

——乳钵或玻璃研磨器；

——微量加样器：100µL～1000µL、20µL～200µL、5µL～50µL和1µL～10µL等多种规格。

2.3.2一次性耗材

本方法使用下列一次性耗材：

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