细胞凋亡与免疫.ppt

*亚“G1”峰检测法:处于增殖周期中的细胞，根据其所处不同周期时相(G0／Gl、S、G2／M)，其DNA含量分布在2n—4n之间。发生凋亡的细胞由于核内DNA裂解成许多小片段，在酒精固定后用细胞膜通透剂使小分子量的DNA片段穿过胞膜而丢失，仅剩下大片段DNA，这些失去部分DNA含量的细胞，在DNA染色后，形成一个DNA含量2n(即G1期细胞)的分布区，称为“亚G1峰”。6.流式细胞分析术(flowcytometry，FCM)第85页,共102页，星期六，2024年，5月*第86页,共102页，星期六，2024年，5月*7.细胞凋亡的其它检测:PS（磷脂酰丝氨酸）在细胞外膜上的检测:磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine,PS）正常位于细胞膜的内侧，在凋亡早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-V(Ca2+依赖性磷脂结合蛋白)能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素（FITC、R-PE）或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。细胞内氧化还原状态改变的检测：CLONTECH公司的ApoAlertTMGlutathioneDetectionKit通过荧光染料monochlorobimane（MCB）体外检测凋亡细胞细胞质中谷光苷肽的减少来检测凋亡早期细胞内氧化还原状态的变化。第87页,共102页，星期六，2024年，5月*细胞色素C的定位检测：通过Western杂交用细胞色素C抗体和COX4抗体标示细胞色素C和COX4的存在位置，从而判断凋亡的发生。线粒体膜电位变化的检测：端粒酶检测：mRNA水平的检测：蛋白印迹法:检测细胞凋亡的相关蛋白分析:如caspase、Fas家族蛋白等.7.细胞凋亡的其它检测:第88页,共102页，星期六，2024年，5月*细胞凋亡检测技术存在的问题

（1）细胞凋亡的判断标准:目前,检测细胞凋亡的许多方法的结果判断标准不一。形态学检查是其他各种检测方法的基础,任何方法的检查结果必须结合形态学检查来判断。梯带状图像并不必然与细胞凋亡相关;TUNEL法在坏死细胞群中也可出现阳性细胞。第89页,共102页，星期六，2024年，5月*（2）细胞凋亡检测结果分析:在一个检测体系中检出了发生凋亡的细胞,生理性还是病理性，需进行致病因素的相关性分析.细胞凋亡检测技术存在的问题

第90页,共102页，星期六，2024年，5月*细胞凋亡检测技术存在的问题

（3）细胞凋亡的定量分析：定量分析包括2个方面,一是群体细胞凋亡的定量,二是细胞凋亡程度的定量。目前,流式细胞仪常用作群体细胞凋亡的定量分析,但在检测中的漏检率和错检率都很高。TUNEL法虽可进行群体定量,但工作量大,同时易出现坏死细胞的假阳性。第91页,共102页，星期六，2024年，5月*展望第92页,共102页，星期六，2024年，5月*☆现代生命科学的发展动态细胞生物学与分子生物学(包括分子遗传学与生物化学)相互渗透与交融是总的发展趋势。（细胞凋亡研究所处的地位）第93页,共102页，星期六，2024年，5月*生命科学的研究从宏观上可以分为

三个层次：核心层次（包括分子生物学和细胞生物学学科）个体生物学层次（对多个物种及种群的结构及功能研究）生物圈层次。无论是对细胞结构和功能的深入研究，还是对细胞重大生命活动规律的探索，都需要用分子生物学的新概念与新方法，在分子水平上进行研究，换句话说，细胞分子生物学或分子细胞生物学将是今后相当一段时间的主流。第94页,共102页，星期六，2024年，5月*2007年《美国科学院院报》（PNAS）的一篇文章中，通过数学方法，对科学杂志的引用关系进行了分析，对当前的88个研究领域进行了排序。分子与细胞生物学当之无愧成为最大热门。

第95页,共102页，星期六，2024年，5月*第96页,共102页，星期六，2024年，5月*对细胞生命活动的研究成为当今生命科学发展的瓶颈

细胞生命活动突变体分析突变体分析蛋白修饰分析基因表达多肽定性分析生物信息学序列测定双向电泳分析DNA分离与克隆