细菌的分离培养与鉴定.ppt

关于细菌的分离培养与鉴定一培养基的制备步骤：1称量药品2溶解3调节PH5过滤分装6包扎标记7灭菌第2页,共26页，星期六，2024年，5月二消毒灭菌法物理灭菌法：干热灭菌法：150-170℃维持1-2h；高压蒸汽灭菌法121℃（101.53kPa）15-30min；其他：过滤除菌法、紫外线灭菌法。化学灭菌法：主要使用一些化学消毒剂进行，如：75％酒精、1％的新洁尔灭等。第3页,共26页，星期六，2024年，5月三细菌的分离、接种与培养细菌的分离方法：稀释法、平板分区划线法。细菌的接种方法：斜面培养基接种法、液体培养基接种法、穿刺接种法、倾注平板法、平板涂布法。细菌的培养方法：需氧培养法CO2培养法厌氧培养法第4页,共26页，星期六，2024年，5月3.1细菌的分离培养方法连续稀释法平板分区划线分区划线分离法：此法常用于含菌量较多的标本如混合细菌的分离。连续划线分离法：此法常用于含菌量不多的标本或培养物中的细菌分离培养第5页,共26页，星期六，2024年，5月第6页,共26页，星期六，2024年，5月1区2区3区4区1234平板分区划线法（学生操作）第7页,共26页，星期六，2024年，5月注意事项划完前一区后，需重新灼烧接种环后再进行下一区的划线。相邻两区要有重叠区域。结果观察：观察各区的生长情况，并看是否有单一菌落长出；菌落的形态、颜色、大小、边缘、透明度都需记录。第8页,共26页，星期六，2024年，5月平皿送37℃温箱培养24小时结果(要求)两种单个菌落分四区无杂菌琼脂不破第9页,共26页，星期六，2024年，5月℃第10页,共26页，星期六，2024年，5月3.2细菌的接种斜面接种法该法主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性。液体接种法多用于一些液体生化试验管或发酵的接种。穿刺接种法此法主要用于半固体培养基、明胶及双糖管的接种。第11页,共26页，星期六，2024年，5月(1)斜面琼脂培养基接种法（2人一组）大肠埃希菌/枯草芽孢杆菌/葡萄球菌送培养24小时(2支/组)一组37℃温箱一组60℃温箱一组4℃冰箱用接种环挑菌后在斜面表面划折线第12页,共26页，星期六，2024年，5月(2)液体培养基接种法（2人一组）1.菌种(任选一种）大肠埃希菌/枯草芽孢杆菌/葡萄球菌2.接种每一菌种分别接种pH5.0/7.2/9.0的营养肉汤各一支3.送37℃温箱培养24小时第13页,共26页，星期六，2024年，5月液体培养基沉淀生长混浊生长表面生长第14页,共26页，星期六，2024年，5月(3)琼脂半固体接种法（1人一份）1.菌种大肠埃希菌/枯草芽孢杆菌/葡萄球菌2.接种用接种针穿刺接种3.送37℃温箱培养24小时第15页,共26页，星期六，2024年，5月3.半固体培养法－观察细菌是否有动力1、3：有动力：呈云雾状2：无动力：沿穿刺线生长，并变粗第16页,共26页，星期六，2024年，5月四、细菌的生化反应1糖发酵试验(Fermentationofsugars)2IMViC试验靛基质产生试验（吲哚试验）甲基红试验V-P试验枸橼酸盐利用试验3硫化氢产生试验4尿素分解试验

第17页,共26页，星期六，2024年，5月糖发酵试验不同细菌分解糖类的能力和代谢产物不同。例如大肠杆菌能发酵葡萄糖和乳糖；而痢疾杆菌可发酵葡萄糖，但不能发酵乳糖。即使两种细菌均可发酵同一糖类，其结果也不尽相同，如大肠杆菌有甲酸脱氢酶，能将葡萄糖发酵生成的甲酸进一步分解为CO2和H2，故产酸并产气；而痢疾杆菌缺乏该酶，发酵葡萄糖仅产酸不产气。

第18页,共26页，星期六，2024年，5月吲哚（靛基质）试验(Productionofindole)有些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸而产生靛基质，靛基质无色，不能直接查见，此时滴加数滴吲哚试剂于培养基的液面上，上层呈玫瑰红色者为阳性，仍呈黄色者为阴性。第19页,共26页，星期六，2024年，5月甲基红（methylred）试验将细菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，37℃培养