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实验一变形链球菌的培养与鉴定

【

目的和要求】:

初步掌握变形链球菌分离和培养的主要程序和方法，并了解其鉴定方法。掌握菌落特点的

观察。掌握在超净工作台中无菌操作的方法。掌握细菌培养的基本方法。掌握厌氧培养箱的

使用方法。

【实验内容】:

简单了解细菌的鉴定方法。

观察变形链球菌的菌落特点（大小，形态，颜色等）。

超净工作台中接种细菌的基本方法，无菌操作的注意事项。

学习使用厌氧培养箱。

【实验用品】

普通光学显微镜、超净工作台、厌氧培养箱。

培养好的MS培养平板，未接种的BHI平板，培养好的菌液、75%酒精。

消毒牙签，ep管，tip头，涂布棒，接种环，移液器。

【方法和步骤】

简单介绍鉴定细菌的方法。

用光学显微镜观察变形链球菌在MS平板上的形态，大小，颜色等特征。

学习接种细菌的基本方法，建立无菌操作的概念。

学习工作台中接种环、涂棒等各器械的特点和注意事项。

划线法接种：用接种环蘸取菌液的在平板上接种的方法。

涂布法接种：用移液器取适量菌液在平板上接种的方法。

简单了解其他接种方法。

学习使用厌氧培养箱。

【思考题】

如何选择合适的鉴定方法鉴定细菌。

划线法和涂布法分别适合什么情况下接种。

【实验报告和评定】

变形链球菌的菌落特点，接种细菌培养状况。

实验二水中游离氟含量的电极法测定

【实验目的】

1．掌握电极法测定氟含量的原理

2．掌握精密酸度计与离子选择电极的使用方法

3．学会绘制标准曲线并进行结果计算

【实验原理】

游离氟是指在溶液中能以氟离子形式单独存在的氟。当氟离子选择电极插入氟离子溶液

中时，由于电极膜内外氟离子浓度不同，在膜两边产生电位差，称之为膜电位（Em）。膜电

位的大小与膜内外氟离子的活度有关，其关系可用能斯特（Nernst）方程来表示。当膜内溶

液氟离子活度不变时，则电位与膜外被测溶液的氟离子活度的关系，可用下式表示：

Em=2.303×(RT/nF)×1ogaF-

式中：R—气体常数，等于8.3148焦耳/度.克分子；

T—绝对温度，等于273十溶液温度℃；

n—离子电荷数，就F-而言，n=-1；

F—法拉第常数，等于96488库伦/克当量；

aF-—氟离子活度，等于氟离子浓度(cF-)与活度系数(g)的乘积，即aF-=g×cF-。

测试时，氟电极与参比电极组成化学电池，电池的电动势E=E0-Em，式中E0为参比电

极的电位。它是一个常数。所以电动势E与1ogaF-成线性关系。上式中2.303RT/nF即为直

线的斜率(又称级差或能斯特系数)。在25℃时，对负1价氟离子来说，它等于-59.16毫伏。

因此，测定电动势E值，就可以得到相应的氟离子浓度。

【实验仪器】

1．氟离子选择性电极

2．精密酸度计

3．磁力搅拌器

4．50ml聚乙烯塑料烧杯。

【实验试剂】

1．总离子强度缓冲液（TISAB）：在1L的烧杯中，加入28.5ml冰乙酸、58.5g氯化钠、41g

乙酸钠、4gEDTA-2Na、1g柠檬酸钠，加蒸馏水至1000ml。

2．氟标准溶液：配制1000ppm的NaF溶液，储存在聚乙烯瓶中，测量前梯度稀释成100ppm、

10ppm、1ppm的系列标准浓度溶液。

【实验步骤】

1．在4个50ml聚乙烯塑料烧杯中，依次精确加入1000ppm、100ppm、10ppm、1ppm的标准

浓度氟溶液各20ml，然后每瓶各精确加入总离子强度缓冲液20ml，摇匀。

2．向各杯中放入一根磁力搅棒。由低浓度开始，将烧杯依次置于磁力搅拌器上，插入氟电

极及参比电极，开启搅拌器，读取电位的毫伏值至不再变化时为止，记录该数值。

3．用毫伏值作纵坐标，浓度的对数为横坐标作线性标准曲线，得出线性方程。

4．精确量取20ml待测水样品，倒入塑料杯中，然后向其中精确加入总离子强度缓冲液20ml，

插入氟电极及参比电极，在搅拌的情况下测量电位的毫伏值。

【实验结果】

1．浓度标准曲线及线性方程：

2．结果计算：

根据样品测得的毫伏值和线性方程计算出水中的含氟量。