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马立克氏病病毒UL13蛋白激酶的体外表达及抗体制
备的开题报告
本实验旨在对马立克氏病病毒（MDV）UL13蛋白激酶进行体外表达
和抗体制备，为后续对其功能和生物学作用的研究提供基础。
1.实验设计
将MDVUL13基因克隆至表达载体pET28a中，利用大肠杆菌
BL21(DE3)进行表达，通过融合标签His-Tag进行筛选和纯化。得到纯化
的蛋白后，使用SDS检测表达情况，并进行Westernblot验证蛋
白是否为目标蛋白。利用得到的蛋白向兔子注射，制备特异性抗体。
2.实验步骤
2.1克隆MDVUL13基因
从MDV中提取总RNA，进行逆转录反应得到cDNA模板，利用PCR
扩增MDVUL13基因，加入限制性内切酶切割位点，纯化PCR产物并进
行酶切，将其连接至表达载体pET28a中，转化大肠杆菌BL21(DE3)进行
克隆。
2.2表达和纯化
将含有重组表达载体pET28a-MDVUL13的大肠杆菌BL21(DE3)在含
有适当抗生素的LB培养基中进行培养，当菌液浓度达到OD600nm=0.6-
0.8时，加入IPTG诱导表达，培养4小时。将细胞离心，将沉淀进行破
细胞提取蛋白，通过His-Tag融合蛋白纯化标记，利用脱盐柱进行纯化。
2.3SDS和Westernblot分析
检测表达的蛋白质量和纯度，用SDS检测表达情况，用
Westernblot对蛋白进行鉴定。
2.4抗体制备
将得到的纯化的蛋白兔子进行免疫注射，制备抗体，采集兔子血清，
制备抗体。
3.预期结果
通过克隆和表达纯化得到MDVUL13蛋白，用SDS检测纯度，
并通过Westernblot检测蛋白的特异性。通过将纯化的蛋白免疫兔子，
制备得到特异性抗体。这些数据将用于MDVUL13蛋白的功能和生物学
作用研究。
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