免疫学检验技术—沉淀反应.pptx

;;;沉淀反应（precipitation)（重点）

可溶性抗原与相应抗体发生特异性结合，在适当条件下而出现的肉眼可见的沉淀现象。

;2.免疫沉淀试验的特点;3.沉淀反应分类;环状沉淀试验：抗原溶液叠加在细玻璃管内的抗体液面上，二者在两液面交界处形成白色沉淀环。

絮状沉淀试验：可溶性抗原、抗体在液相中特异性结合，形成絮状沉淀物。

免疫比浊度分析：透射、散射和免疫胶乳比浊法，应用于自动化。;指可溶性抗原、抗体在含有电解质的凝胶内自由扩散形成浓度梯度，二者在比例合适的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。根据抗原与抗体反应的方式和特性，可分为单向琼脂扩散试验和双向琼脂扩散试验。

;抗体与待测的抗原,在两者比例合适的部位结合形成沉淀环。环的大小与抗原的浓度成正相关。

本法稳定、简便、无需仪器设备。重复性和线性均可信，但灵敏度稍差、耗时长、影响因素多。;单向免疫扩散试验;将抗原抗体分别加在琼脂糖凝胶不同的对应孔中，两者在凝胶中自由扩散，在比例合适处形成白色沉淀线。沉淀线的位置、形状以及对比关系，可进行定性分析，如抗原或抗体的存在与否、相对含量估计、相对分子量分析和性质分析。

本法操作简单、特异性高、结果可靠、成本低廉，但灵敏度低，耗时长，不能精确定量。

;1.抗原或抗体的定性分析。

2.抗原、抗体的相对分子量和相对浓度的估计。

;抗原完全相同;4.抗体效价的测定

5.抗原或抗体纯度的鉴定;电泳分析与沉淀反应的结合产物，即可溶性抗原和抗体在直流电场的作用下，在凝胶内加速定向泳动，彼此相遇而特异性结合，在比例合适处形成可见的沉淀物。该技术提高了沉淀反应的速度和敏感度，广泛用于临床实验诊断和科学研究。

;无沉淀线出现表明无相应的抗原。

沉淀线位于抗原抗体孔中间，说明两者比例较适合。

沉淀线偏向抗原孔一方，表示抗体浓度＞抗原，反之，则是抗体浓度＜抗原浓度。;单向免疫扩散和电泳的定量检测技术。固定抗体不移动，抗原向正极泳动，随着抗原量减少，基底区越来越窄，形成的沉淀线逐渐变窄，形成一个如火箭的沉淀峰，峰的高度与抗原量呈正相关。;三、免疫电泳技术;SP;;沉淀试验的临床应用;3.对流免疫电泳与火箭免疫电泳因存在电渗作用，目前已不推荐使用。

4.免疫电泳扩散时间长，影响因素多，结果较难分析。

5.免疫固定电泳分辨力强，敏感度高，结果易于分析，现常用于鉴定迁移率相近的蛋白和M蛋白，免疫球蛋白轻链，尿液、脑脊液等微量蛋白，游离轻链，补体裂解产物等，临床最常用于M蛋白的鉴定与分型，并已列入临床实验室的常规检测工作。;1.主要用于血液、体液中蛋白质的测定。

2.优点：稳定性好，敏感度高，精确度高，简便快速，易于自动化，无放射性核素污染，适合大批量标本检测。

3.对流免疫电泳与火箭免疫电泳技术由于电渗的缘故已不推荐使用。

4.免疫电泳扩散时间长，影响因素多，结果不易分析。

5.免疫固定电泳分辨力强，敏感度高，结果易于分析，常用于M蛋白的鉴定与分型。;小结;凝集反应与沉淀反应的比较;;;;环状沉淀试验：抗原溶液叠加在细玻璃管内的抗体液面上，二者在两液面交界处形成白色沉淀环。

絮状沉淀试验：可溶性抗原、抗体在液相中特异性结合，形成絮状沉淀物。

免疫比浊度分析：透射、散射和免疫胶乳比浊法，应用于自动化。;第一节液相内沉淀试验;絮状沉淀试验是将抗原与相应抗体混合，在电解质存在的条件下，抗原抗体结合形成肉眼可见的絮状沉淀物。

方法受抗原抗体比例的影响非常明显

应用于测定抗原抗体反应的最适比例

三种类型：

①抗原稀释法：抗原最适比例

②抗体稀释法：抗体最适比例

③方阵滴定法：抗原抗体最适比例;1:2;;;;环状沉淀试验：抗原溶液叠加在细玻璃管内的抗体液面上，二者在两液面交界处形成白色沉淀环。

絮状沉淀试验：可溶性抗原、抗体在液相中特异性结合，形成絮状沉淀物。

免疫比浊度分析：透射、散射和免疫胶乳比浊法，应用于自动化。;第一节液相内沉淀试验;絮状沉淀试验是将抗原与相应抗体混合，在电解质存在的条件下，抗原抗体结合形成肉眼可见的絮状沉淀物。

方法受抗原抗体比例的影响非常明显

应用于测定抗原抗体反应的最适比例

三种类型：

①抗原稀释法：抗原最适比例

②抗体稀释法：抗体最适比例

③方阵滴定法：抗原抗体最适比例;1:2;;;;指可溶性抗原、抗体在含有电解质的凝胶内自由扩散形成浓度梯度，二者在比例合适的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。根据抗原与抗体反应的方式和特性，可分为单向琼脂扩散试验和双向琼脂扩散试验。

;抗体与待测的抗原,在两者比例合适的部位结合形成沉淀环。环的大小与抗原的浓度