凝集反应（免疫学检验技术课件）.pptx

凝集反应;凝集反应是经典的血清学反应，使用历史悠久并一直沿用至今。

早在1896年，Widal就利用伤寒病人的血清与伤寒杆菌发生特异性凝集的现象，有效地诊断伤寒病。

至1903年，Landsteiner在特异性血凝现象的基础上发现了人类ABO血型，并于1930年获得了诺贝尔医学奖。;第十三章凝集试验

(agglutination)

;反应中的抗原称为凝集原（agglutinogen），抗体称为凝集素（agglutinin）。

根据凝集反应的原理，以后又发展建立了各种间接凝集试验、间接凝集抑制试验以及固相免疫吸附血凝试验等新方法。;特点;反应阶段：

抗原抗体的特异性结合

出现肉眼可见的凝集现象

反应特点：

IgM的作用比IgG大数百倍

IgG与抗原结合后，常不出现凝集反应，称不完全抗体

;主要技术类型;第一节直接凝集反应;;可以分为玻片法与试管法.

;将伤寒杆菌诊断血清加于第1、2格，再于三个区分别加伤寒杆菌及痢疾杆菌，混匀，观察。;方法评价:

定性试验

简便和快速

敏感度低

;在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。;;血清学诊断－－肥达反应;;肥达反应(Widaltest);肥达实验结果判断;结果判断;OHAB诊断意义（可能）;H与O抗体的性质及其消长意义;方法评价：

半定量试验

简便、快速

敏感度低

可有假阳性;三、微孔板法：

抗原抗体在微孔板中发生反应;四、柱凝集法：

抗原抗体在凝集柱（凝胶/玻璃珠）中发生反应;检测项目;第二节间接凝集反应

(indirectagglutination);一、载体的种类及处理方法;载体的条件：

1.不溶于水，理化性质稳定且无化学和免疫学活性。

2.大小均匀，密度与介质相近。

3.能直接吸附和通过偶联剂牢固结合抗原抗体。

;正向间接凝集试验

反向间接凝集试验

间接凝集抑制试验

协同凝集试验;;正向间接凝集反应;;反向间接凝集反应;凝集抑制实验;;间接凝集抑制反应;三、间接血凝试验;1.载体;2.方法;微量反应板;;;四、胶乳凝集试验;四、胶乳凝集试验;梅毒甲苯胺红不加热血清检测（TRUST正向间接凝集）;【意义】

RPR是定性试验，用于梅毒的筛选和疗效的判定。阳性标本如??需要，也可将血清作1:2—1:32稀释后，按上述方法做半定量试验。;【操作方法】

1．待检血清50μl，加入卡片圆圈内，使布满整个圆圈。

2．阴性、阳性对照血清各50μl，同上。

3．在每份血清上垂直滴加一滴TRUST试剂。

4．旋转摇动8分钟，约100r／min，肉眼观察结果。

【结果观察与报告】

阳性：可见中等或较大的红色凝集物

弱阳性：可见较小的红色凝集物

阴性：无凝集物

;TPPA

（梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验）;;TPPA是梅毒确诊试验。TPPA在梅毒治愈后它还是阳性的，而RPR可以转阴或者滴度效价很低;RF因子检测（正向间接凝集）;【意义】

主要用于类风湿疾病的辅助诊断。但应注意，某些免疫性疾病(如全身性红斑狼疮等)、传染性单核细胞增多症以及一些老年人也可有类风湿因子水平增高的表现。;【操作方法】

(1)试剂使用前，预置达室温。

(2)轻轻摇匀胶乳试剂

(3)反应板上滴加一滴未稀释血清滴(20ul)

(4)然后滴加一滴胶乳试剂，并立即旋转摇动使两者充分混匀。

(5)每次实验均应设阳性与阴性对照。

【结果观察与报告】

2分钟内出现明显而均匀的凝集颗粒者为阳性，不凝集者为阴性。（凝集RF20IU/mL)

必要时阳性标本可进一步作二倍连续稀释，测定RF滴度。;ASO检测（正向间接凝集）;【操作方法】

(1)试剂使用前，预置达室温。

(2)轻轻摇匀胶乳试剂

(3)反应板上滴加一滴未稀释血清滴(每滴约0．05ml)

(4)然后滴加一滴(每滴约0．05ml)胶乳试剂，并立即旋转摇动使两者充分混匀。

(5)每次实验均应设阳性与阴性对照。

【结果观察与报告】

2分钟内出现明显而均匀的凝集颗粒者为阳性，不凝集者为阴性。

必要时阳性标本可进一步作二倍连续稀释，测定ASO滴度（半定量）。;【注意事项】

(1)ASO胶乳试剂加入后应在规定时间内观察