沉淀反应（免疫学检验技术课件）.pptx

沉淀反应;沉淀反应

(precipitation)

;分类;第一节液相内沉淀反应;液相内沉淀反应;方法;Ab;CRP检测（环状沉淀试验）;【材料】

1．肺炎球菌C多糖2．直径小于6mm的小试管，毛细滴管、试管架等。3.待检血清

【操作方法】

取小试管，先加0．1ml患者血清于试管底部，再沿管壁轻轻加入等量肺炎球菌C多糖液，使两液成明显界面，静置室温分别于10、30、60分钟时观察结果。

【结果观察与报告】

10分钟内出现浓密白色环，为强阳性；

30分钟内出现白色环，为阳性；

60分钟不出现白色环，为阴性。;【评价】

环状沉淀试验为定性测定法，简便、快速、实用。可用于血迹鉴定、炭疽抗原诊断(Ascoli)等。本法敏感性较低。;原理;在抗体浓度不变的情况下随着抗原浓度不断上升免疫沉淀反应变化如图;1:2;第二节凝胶内沉淀反应;;1.测定沉淀环直径

2.在标准曲线上???找相应抗原浓度;;Mancini曲线：K=C/d2

适用于大分子抗原，长时间扩散

Fahey曲线：K=logC/d

适用于小分子抗原，短时间扩散

;;影响因素;二、双向琼脂扩散;原理;一种抗原或抗体混合物成分的定性与定量的分析方法。通常采用凝胶作为支持介质，让抗原与抗体混合物在介质中互相扩散，相互反应形成沉淀弧线或沉淀弧带。;原理示意图;方法：

1.制板：

5mL0.9%琼脂

2.打孔

3.加样

4.扩散：

37℃湿盒扩散24或48小时;;Ag;“1”为单一抗原抗体系统。;第三节凝胶免疫电泳技术;;火箭免疫电泳;对流免疫电泳;电渗：指在电场中液体对于一个固定固体的相对移动称为电渗。液体移动的方向取决于固体带的是正电荷或负电荷，如果电渗的方向与样品的移动方向相同，那么样品的迁移率加快，反之，减慢，甚至倒退。实际上在电泳的过程中受到电泳力和电渗力的双重作用。

;步骤：;;;SP;第十四章

免疫比浊分析;免疫比浊分析是应用抗原、抗体在液相中特异性反应形成免疫复合物，复合物微粒对光线的干扰可用仪器检测出来，以此对可溶性抗原进行定量。;1.透射比浊法（transmissionturbidimetry)

2.散射比浊法（nephelometry)

①速率散射比浊法(ratenephelometry)

②终点散射比浊法(endpointnephelometry)

3.免疫胶乳比浊法;透射比浊法和散射比浊法光路;原理;免疫透射比浊法;免疫透射比浊法;透射比浊法的缺点：;应用;原理;免疫散射比浊法;免疫散射比浊法;原理;用于免疫沉淀反应的缺陷;原理;;;方法评价：

1.敏感度高

2.快速(20~30S。测定的是抗原抗体反应的第一阶段，不必达平衡）

3.抗原抗体结合的动态测定，理论上测定不受本底散射信号的影响

4.可检测微量样品;西门子BNⅡ特定蛋白分析仪;应用;1．双向琼脂扩散试验中

A.抗体向含有抗原的琼脂内扩散

B．抗原向含有抗体的琼脂内扩散

C.抗原和抗体同时向琼脂内扩散，在比例合适处形成沉淀线

D.可对抗体进行定量分析E.可对抗原进行定量分析

2．双扩平板法测量两种不相关成分的抗原时，沉淀线应为

A．二条直线相交叉B．二条弧线完全融合

C.二条弧线部分融合D.二条弧线不连接E．二条直线平行

3.双扩平板法出现多条沉淀线的原因是

A.抗原过剩B．抗体过剩C.抗原缺乏

D．抗体缺乏E．抗原或抗体不纯

4.双扩试验平板法中，若抗原含量较大，则反应沉淀线应

A.靠近抗原孔B．靠近抗体孔C.在两孔之间

D.呈多条沉淀线E．不出现沉淀线

;6.双向琼脂扩散试验中，若抗原的含量比抗体多且分子量比抗体小，则沉淀线应为

A.靠近抗原孔，且弧线弯向抗原侧

B．靠近抗原孔，且弧线弯向抗体侧

C．靠近抗体孔，且弧线弯向抗原侧

D.靠近抗体孔，且弧线弯向抗体侧

E．居于抗原孔和抗体孔中间，且弧线弯向抗原侧

7.双扩平板法测量两种性质完全相同的抗原时，沉淀线应为

A.二条直线相交叉B.二条弧线完全融合

C.二条弧线部分融合D．二条弧线不连接E．二条直线平行

8.双扩试验平板法中，若抗原抗体含量相同，则反应沉