免疫学检验技术—免疫细胞及其功能检验技术.pptx

知识目标

1.掌握：单个核细胞和淋巴细胞及其亚群的分离纯化；T细胞及其亚群的表面标志和功能检测方法；B细胞功能检测方法和原理；NK细胞的表面标志。

2.熟悉：NK细胞功能的检测方法和原理。

3.了解：中性粒细胞、巨噬细胞功能检测方法和原理。

能力目标

掌握密度梯度离心法分离外周血单个核细胞的操作流程；

熟悉FCM和磁珠分离法分离淋巴细胞及其亚群的操作方法。

思政-素质目标

责任心、质控、生物安全意识、临床免疫学思维

;目录;免疫细胞是指参与免疫应答或与免疫应答相关的细胞，主要包括淋巴细胞、单核-巨噬细胞和树突状细胞等。

通过分离、纯化免疫细胞及其亚群，并对其数量和功能测定，可以判断机体免疫功能状态，对指导临床实践和科学研究具有重要意义。;第一节免疫细胞的分离与纯化;一、白细胞的分离;（二）高分子聚合物沉降法;二、外周血单个核细胞的分离;细胞种类;（一）Ficoll分离法;（二）Percoll分层液法;三、淋巴细胞的纯化及亚群的分离;（一）淋巴细胞的纯化;（二）淋巴细胞的分离;（二）淋巴细胞的分离;（二）淋巴细胞的分离;（二）淋巴细胞的分离;四、吞噬细胞的分离;（一）单核细胞的分离;（二）巨噬细胞的分离;（三）中性粒细胞的分离;第二节淋巴细胞数量及功能检测;一、T细胞数量及功能检测;间接荧光免疫法;（二）T细胞功能检测;PBMC;未转化淋巴细胞;培养液;原理：;51Cr释放法;;MHC-肽四聚体技术;淋巴细胞内细胞因子检测;分泌的细胞因子ThlTh2;二、B细胞数量及功能检测;（二）B细胞功能检测;;溶血空斑试验;;三、NK细胞数量及功能检测;（二）NK细胞功能检测;第三节吞噬细胞功能检测;体内实验法--皮肤窗口法;体外法--Boyden小室法;体外法--琼脂糖平板法;将细胞悬液与金黄色葡萄球菌或白色念珠菌悬液混合，温育后涂片、固定和染色。在油镜下观察中性粒细胞对细菌的吞噬情况，计数100个细胞中吞噬和未吞噬细菌的中性粒细胞数，并记录吞噬的细菌数。;（三）中性粒细胞杀伤功能检测;二、巨噬细胞功能检测;正常小鼠肝中库普弗细胞可吞噬清除90％炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10％炭粒。据此给小鼠静脉注射定量印度墨汁（炭粒悬液），间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判断巨噬细胞的功能。;（二）巨噬细胞吞噬功能检测;小结;知识目标

1.掌握：单个核细胞和淋巴细胞及其亚群的分离纯化；T细胞及其亚群的表面标志和功能检测方法；B细胞功能检测方法和原理；NK细胞的表面标志。

2.熟悉：NK细胞功能的检测方法和原理。

3.了解：中性粒细胞、巨噬细胞功能检测方法和原理。

能力目标

掌握密度梯度离心法分离外周血单个核细胞的操作流程；

熟悉FCM和磁珠分离法分离淋巴细胞及其亚群的操作方法。

思政-素质目标

责任心、质控、生物安全意识、临床免疫学思维

;目录;免疫细胞是指参与免疫应答或与免疫应答相关的细胞，主要包括淋巴细胞、单核-巨噬细胞和树突状细胞等。

通过分离、纯化免疫细胞及其亚群，并对其数量和功能测定，可以判断机体免疫功能状态，对指导临床实践和科学研究具有重要意义。;免疫细胞的分离方法很多，主要根据细胞表面标志、理化性状和细胞功能等特征。

应根据实验目的、所分离的目的细胞群种类、数量和纯度等要求选择分离方法。

所用的方法应力求操作简便、尽量保持细胞活性兼顾细胞纯度和获得率。;一、白细胞的分离;（二）高分子聚合物沉降法;二、外周血单个核细胞的分离;细胞种类;（一）Ficoll分离法;（二）Percoll分层液法;三、淋巴细胞的纯化及亚群的分离;（一）淋巴细胞的纯化;（二）淋巴细胞的分离;（二）淋巴细胞的分离;（二）淋巴细胞的分离;（二）淋巴细胞的分离;四、吞噬细胞的分离;（一）单核细胞的分离;（二）巨噬细胞的分离;（三）中性粒细胞的分离;知识目标

1.掌握：单个核细胞和淋巴细胞及其亚群的分离纯化；T细胞及其亚群的表面标志和功能检测方法；B细胞功能检测方法和原理；NK细胞的表面标志。

2.熟悉：NK细胞功能的检测方法和原理。

3.了解：中性粒细胞、巨噬细胞功能检测方法和原理。

能力目标

掌握密度梯度离心法分离外周血单个核细胞的操作流程；

熟悉FCM和磁珠分离法分离淋巴细胞及其亚群的操作方法。

思政-素质目标

责任心、质控、生物安全意识、临床免疫学思维

;目录;许多疾病或生物及其他理化因素均可引起淋巴细胞数量和功能变化。

数量检测：根据淋巴细胞及其亚群的表面标志。

功能测定：包括体内试验和体外试验。;一、T细胞数量及功能检测;间接荧光免疫法;（二）T细胞功能检测;PB