视网膜母细胞瘤病人体细胞中RB1基因突变的检测 .pdfVIP

视网膜母细胞瘤病人体细胞中RB1基因突变

的检测

盛迅伦，吴伟民，庄文娟，容维宁，王娟，夏美华，章玲

【摘要】目的检测视网膜母细胞瘤(RB)病人体细胞中RB1基因

突变，探讨RB1基因突变的分子生物学机制。方式应用PCR-SSCP技

术筛查RB病人白细胞基因组DNA，测序分析确信突变。结果在12例

RB病人中，确信3例RB1基因生殖细胞性突变。他们别离是第10外

显子中T至A杂合性突变，将苯丙氨酸编码序列变成酪氨酸编码序列；

第10外显子1bp碱基缺失(GAT→AT)，发生阅读框架改变；第22

外显子中A至T杂合性突变，将精氨酸序列变成终止密码。结论这

3例RB1基因生殖细胞性突变的方式为点突变和小缺失，这些突变改

变了RB1基因的遗传信息，致使异样的RB1基因蛋白产生，致使视网

膜母细胞瘤的发生。

【关键词】视网膜母细胞瘤基因突变RB1

DetectionofheterozygousmutationsofRB1geneinpatients

withretinoblastoma

【Abstract】ObjectiveTostudyRB1heterozygousmutations

inpatientswithGenomicDNAwasusedasatemplateforthePCR

reactiontoamplifyallexonsofRB1PCRproductswerescreened

bysinglestrandconformationpolymorphism(SSCP)andsubjected

todirectThreegermcellmutationsintheRB1genewere

identifiedincollectedgenomicDNAfromRBpatients:aTtoA

transition(TTC→TAC)atexon10，adeletionG(GAT→AT)atexon

10，aAtoTtransition(AAG→ATG)atexonMutationsinRB1gene

areinvolvingafewbasepairsinthisaresultofsuch

mutation，thenormalfunctionofRBisusuallydisrupted，and

retinoblastomaoccurred.

【Keywords】retinoblastomagenemutationRB1

视网膜母细胞瘤（简称RB），是婴幼儿最多见的高度恶性、致死

率高的眼内恶性肿瘤。由视网膜母细胞瘤基因(RB1基因)的两条等位

基因同时失活所致，分遗传型（30%～40%）和非遗传型（60%～70%）

两种方式。遗传型视网膜母细胞瘤病人体细胞都携带RB1基因生殖细

胞性突变，85%～90%可能会发生双眼或单眼多灶型视网膜母细胞瘤，

下一代子女中约有50%的机遇遗传这一突变的基因，而其中的90%会患

视网膜母细胞瘤［1，2］。因此，基于RB1基因生殖细胞性突变检测(遗

传分型、产前与病症前基因诊断)，目前是视网膜母细胞瘤的预防与初

期诊断的有效途径。为了进一步了解RB病人RB1基因的突变特点，为

临床遗传检查提供更多靠得住的信息，笔者应用分子生物学技术对RB

病人体细胞中RB1基因进行突变位点的检测，并结合以前的工作［3］，

探讨了RB1基因突变的分子生物学机制。

1资料与方式

一样资料共搜集散发RB病人12例，4例为双眼RB，其他8

例为单眼RB，年龄1～5岁；同时搜集了12例无亲属关系的健康人作

为正常对照组。

方式

DNA提取采外周静脉血10ml，应用DNA分离试剂盒（Promega

公司产品）提取全血白细胞DNA。

聚合酶链反映（polymerasechainreaction，PCR）应用美国

PE公司2400型PCR仪。参照T